[发明专利]采用植物组织培养葡萄风信子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡萄风信子的培养方法，尤其是一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)是百合科蓝壶花属，又名蓝壶花、葡萄百合、葡萄水仙。葡萄风信子为多年生草本球根花卉，植株矮小，叶线状披针形，丛生，长10～30cm，宽0.5～1.5cm，穗状花序，1～3枝自叶丛中抽出，直立圆筒状，花茎高10～30cm，着花20～40朵。花色有蓝色、蓝紫色、白色、淡蓝、淡粉色和黄色，秀丽高雅。花期早，自然花期3月中旬到4月上旬，开放时间长，群体开花时间可达20～30天。在园林中，常用来布置多年生混合花境、花坛镶边或点缀山石，是良好的林下地被花卉，亦可作盆栽观赏，别具情趣，是具有较高观赏价值的纯化花卉，适于盆栽观赏与切花。

葡萄风信子的传统繁殖方法以分植鳞茎为主，繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化，鳞茎萎缩，不利于其品质的延续和开发。利用组织培养技术在短时间内既能大规模的扩大植株的繁殖量，使其亲本的优良性状得以保存，并且不受自然环境条件的限制。组织培养技术已经在水仙、百合、风信子等球茎植物上得到很好的应用，故研究植物组织培养生产葡萄风信子是很有现实意义的。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种采用植物组织培养葡萄风信子的方法，解决了葡萄风信子繁殖率低并带有病菌，使品种严重退化、鳞茎萎缩，不利于其品质延续和开发的问题。

按照本发明提供的技术方案，所述采用植物组织培养葡萄风信子的方法，特征是，包括以下步骤：

(1)制备培养基：选择MS培养基作为基本培养基，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、3-吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)和3-吲哚丁酸(IBA)作为调控的生长激素分别制备五种培养基：

培养基A：MS+2，4-D 0.5～1.0mg/L+6-BA 1.0～2.0mg/L，

培养基B：MS+NAA 0.5～1.0mg/L+6-BA 1.0～2.0mg/L，

培养基C：MS+IBA 0.5～1.0mg/L+6-BA 1.0～2.0mg/L，

培养基D：MS+IAA 0.2～1.0mg/L，

培养基E：MS+IBA 0.5～1.0mg/L；

培养基A、B、C和D中均附加25～30g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂，培养基E中附加25～30g/L的蔗糖和1～2g/L的琼脂，用1～2mol/L的NaOH溶液和HCL溶液调pH至5.8～6.0，并将培养基A、B、C、D和E在高压蒸汽灭菌锅中在121～125℃下灭菌15～20min，高压蒸汽灭菌锅中的压力为0.1～0.15MPa；

(2)外植体消毒：选用葡萄风信子鳞茎作为外植体，用自来水冲洗1～2h后，在无菌操作台上用浓度为1％～2％的84消毒液消毒0.5～2min，用无菌水冲洗2～3次，再用浓度为0.1％～0.2％的升汞消毒8～12min，最后用无菌水冲洗4～5次，备用；

(3)外植体诱导培养：将消毒后的外植体切成1～1.5cm²的片状外植体后，接种在培养基A上，接种瓶内每瓶平放3～5片的片状外植体，在培养室内进行诱导培养；20～30天后，在片状外植体的切口处产生淡黄色愈伤组织；

(4)增殖培养：将诱导培养出的愈伤组织转接到培养基B上培养30～40d，使愈伤组织稳定的繁殖下去，保持进一步分化的能力；

(5)不定芽分化：将经增殖培养的愈伤组织转接到培养基C上，30～40d后可得到分化的不定芽；

(6)生根培养：将不定芽转入培养基D上继续培养，培养30～40d得到株高为2～3cm的组培苗；

(7)继代培养：将生根的组培苗转接到培养基E上，培养7～10d后，组培苗的根须达到4～5cm；