[发明专利]一组早期肝癌分子标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一组早期肝癌分子标志物及其应用。

背景技术

肝癌的形成是一个多因素、多步骤、多基因参加的复杂过程，一般经历肝炎，肝硬化，不典型增生结节，肝癌的进展过程。近年来，不典型增生结节（dysplastic nodule，DN）作为肝癌癌前病变日益受到重视。硬化肝中的DN广泛被公认为是肝癌癌前病变。而目前临床上鉴别诊断不典型增生结节和早期肝癌（根据BCLC规定，eHCC的定义为单个肿瘤或3个肿瘤大小之和<3cm，Child-Pugh A和B，不达到肝移植标准）主要依靠影像学诊断或病理学者的HE染色切片的镜下诊断，尚缺乏有效的免疫组织学诊断标志物。从肝癌治疗的角度来看，癌前期的早期治疗有效率可达90%，而进展期肿瘤的总体治愈率仅为5%。肝癌的 5年生存率，亚临床期（I 期）为53.2%，中期（II期）为28.2%，而晚期（III）几乎是0%。肝癌的早期诊断，早期治疗非常重要。

目前临床应用的HCC血清标志物有甲胎蛋白（AFP），AFP-L3，脱-γ-羧基凝血酶原（DCP）。实验室研究阶段的HCC标志物有硫酸肝素蛋白多糖3（GPC3），高尔基蛋白73（GP73），转化生长因子-β1（TGFβ1），胰岛素样生长因子（IGF-II），肝细胞生长因子（HGF）等等。具体说，当AFP界值为20 ng/ml时AFP诊断HCC的敏感性和特异性分别为41%-65%和80%-90%（Clin Chim Acta，395: 19-26，2008）。AFP-L3的百分比的诊断值界定为35%时，对HCC诊断的敏感性和特异性分别为33%和100%（Clin Gastroenterol Hepatol，9: 394-402，2007）。 DCP的界值为40 mAU/ml时，对HCC诊断的敏感性和特异性分别为58%和97%（Am J Gastroenterol，101: 2038-2043，2006）。

另外影像学诊断方法主要有超声波（US），CT扫描，磁共振成像（MRI）等。杨文德（临床消化病杂志，第17卷，第5期，222-223，2005年）等探讨3种非创伤性影像检查方法US，CT和MRI在肝癌诊断中的敏感性和准确性。他们回顾性地比较分析了79例肝癌的US、CT及MRI优缺点。其结果，肝癌确诊率为US: 73.08%、CT: 87.34%、MRI: 87.76%。US对eHCC的检出率较高，但确诊率较低。CT和MRI对中晚期肝癌确诊率较高。但任何一种单独的方法不足以满足临床的需要，需合理地综合利用，提高eHCC诊断的准确率。更重要的是，上述的方法无论是分子标志物还是影像学方法其灵敏度和特异度均有限，加之这些方法对于eHCC 的诊断效果不好，特别是eHCC和不典型增生结节的鉴别诊断。

因此，发现DN和eHCC的标志物将为临床提供强有力的鉴别诊断工具。另外，DN与eHCC差异性表达的分子可以预测肝癌的发生，也可以为阻断其发展成为肝癌提供线索和方案。因此，DN特异性标志物的发现及其应用将给临床提供区分DN和eHCC的有效分子标志物，并对阐明肝癌的分子发病机理和提高eHCC的诊断率具有非常重要的意义

ACY1蛋白是与N-酰化或N-乙酰化氨基酸（L-天冬氨酸除外）的水解相关的酶。ACY1基因的缺失引起ACY1酶的缺损，导致代谢功能紊乱，脑病，非特异性的神经性运动的迟缓，显著的肌肉张力减退等临床症候。SUOX是亚硫酸氧化酶，SUOX基因的缺失引起亚硫酸氧化酶的缺损（硫酸半胱氨酸尿症），导致合并脑萎缩的多灶性白质脑疾病（multicystic leukoencephalopathy），患者常伴癫痫，最终导致早期死亡。PYGL是重要的糖代谢异构酶，主要调节 1，4-α-D-葡萄糖的磷酸化。

发明内容

本发明的目的是提出一组新的早期肝癌的分子标志物，并提供该早期肝癌的分子标志物在制备早期肝癌诊断试剂中的应用。

为了达到上述目的，本发明提供了一组新的高分化早期肝癌的分子标志物，包含氨基酰化酶-1（ACY1）、亚硫酸盐氧化酶（SUOX）和糖原磷酸化酶（PYGL）。氨基酰化酶-1、亚硫酸盐氧化酶和糖原磷酸化酶在早期肝癌组织中的表达水平比肝硬化，不典型结节中的表达显著降低，可以成为区别肝硬化和早期肝癌以及不典型结节和早期肝癌的标志物。