[发明专利]一种快速繁殖紫龙角的培养基

说明书

技术领域：

本发明涉及一种快速繁殖紫龙角的培养基，属植物细胞与组织培养生物技术领域。

背景技术：

紫龙角是萝藦科水牛掌属中的一种多年生草本肉质植物，既有观赏价值，也是珍贵的药用植物。特别是紫龙角肉厚、产量高、甾类成分丰富，具有极大的商业开发价值。

国内外对萝藦科植物的研究主要集中在其化学成分、药理、临床等方面。基于细胞的全能性，任何植物的离体细胞在人工培养下同样具有它们“母体”植物合成药用成分的能力。因此，可通过改变和调节离体培养条件，将有效地提高其含量和质量，再利用物理和化学方法对培养物进行药用成分提取，生产各类药物或药物前体。但是紫龙角常规繁殖效率低，组织培养还未曾有过研究报道。那么采用细胞工程手段，在适当的生长条件下使细胞、组织生长并不断增殖，达到人工优良育种和大量制备各次生代谢产物的目的。例如，可通过植物器官(根尖、茎尖、叶质基、花药等)的离体培养，再生成新植株(试管苗)。这种方法能快速、大量繁殖一些有价值的苗木、花卉、药材和濒危的植物。

发明内容：

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速繁殖紫龙角的培养基，将组织培养过程分为四步，每一步对应配有相应的培养基；具有准确定量、工艺简单、成本低、扩繁快、生产效率高的特点。

本发明是通过如下技术方案来实现上述目的的。

本发明所提供的一种快速繁殖紫龙角的培养基包括四个部分：

(1)诱导愈伤组织培养基；

(2)直接诱导丛生芽培养基；

(3)复壮增殖不定芽培养基；

(4)生根培养基；

所述的诱导愈伤组织培养基，其组成为以“麦基一号”培养基为基本营养，每1L“麦基一号”培养基中加入：

水解酪蛋白(CH)300mg；

6-苄基嘌呤(6-BA)1.0--1.8mg；

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.5--2.0mg；

所述的直接诱导丛生芽培养基，其组成为以“H”培养基为基本营养，每1L“H”培养基中加入：

苯基噻二唑基脲(TDZ)4mg；

α-萘乙酸(NAA)0.4mg；

所述的复壮增殖不定芽培养基，其组成为以“改良H”培养基为基本营养，每1L“改良H”培养基中加入：

苯基噻二唑基脲(TDZ)4mg；

α-萘乙酸(NAA)0.4mg；

所述的生根培养基，其组成为以“1/2MS”培养基为基本营养，每1L“1/2MS”培养基中加入：

α-萘乙酸(NAA)2--5mg；

将上述培养基的PH值调整为6--6.2。

本发明与现有的技术相比具有如下有益效果：

1、可对紫龙角进行快速繁殖及育种。

2、可建立完整的再生体系，实现工厂化生产。

3、可为新甾类药物的开发与生产提供离体培养技术，提高工艺效率。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

利用本发明快速繁殖培养紫龙角的过程为：

1、培养基的配制：

分别将四种培养基按比例进行配制，将配制好的培养基加热溶解后调整其PH值为6--6.2，装入洗净的圆柱瓶中，封口后高压灭菌15分钟左右，待用。

2、外植体的处置：

选择生长健壮，以带有紫褐色斑纹和不带紫褐色斑纹的植株，分别取带腋芽茎块、不带腋芽茎块、刺突共6种外植体，在饱和洗衣粉溶液中摇动5--10分钟转入清水漂洗后进入接种室。先用75％酒精灭菌5秒，立即用0.1％HgCl₂灭菌8分钟，无菌水冲洗5次，沥干后备用。

3、诱导愈伤组织培养：

将不带腋芽的外植体切成0.5cm厚的茎块接种在诱导愈伤组织培养基上，每瓶2块。培养条件为：先暗室培养6天之后再转入光下培养；温度25±2℃，光周期14h，光强为2000Lx，光质为日光灯。培养6天后出愈。30天后统计诱导率高达90％以上。

4、直接诱导丛生芽培养：

将带腋芽的茎块、刺突茎块接种在直接诱导丛生芽培养基上，每瓶2块。培养条件为：25±2℃，光周期12h，光强2000Lx，30天左右即长许多丛生小芽(平均每个外植体四周着生15个左右)。

5、复壮增殖不定芽培养：