[发明专利]灵芝细胞培养液及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物技术领域的培养液及其应用，具体是一种灵芝细胞培养液及其应用。

背景技术

经过对现有技术的检索发现，

灵芝(Ganoderma lucidum)为担子菌纲、多孔菌科、灵芝属高等真菌，为我国久负盛名的药用真菌。药理研究表明，灵芝有广泛的药理作用，如抗HIV病毒，免疫调节，抗心肌缺血，调节血脂，降血糖，镇静作用，保肝作用，抗放射和抗化疗，抗缺氧和抗衰老作用等。研究发现，灵芝活性物质中三萜是主要有效成分之一，它具有很多的生理活性，而灵芝酸又是其中最主要的三萜组分。自1982年Kubota等人首次分离得到灵芝酸A，B类化合物以来，灵芝中已有200多种三萜被分离出来，其中100多种是灵芝酸。研究表明，灵芝酸T具有诱导肺癌细胞凋亡活性(Tang W.，Liu J.-W.，Zhao W.-M.，Wei D.-Z.，Zhong J.-J.Life Sciences，80(2006)205～211.)，而灵芝酸Me具有抑制肿瘤扩散(N.H.Chen，J.W.Liu，J.J.Zhong.Journal of Pharmacological Sciences，108(2008)212～216)和增强IL-2和IFN-γ表达以及增加NK细胞活性(G.Wang，J.Zhao，J.Liu，Y.Huang，J.-J.Zhong，W.Tang.International Immunopharmacology，7(2007)864～870.)。

经对现有技术的文献检索发现，中国发明专利申请公开说明书CN1375557A披露了如下内容：钟建江和汤亚杰公开了生物反应器中灵芝细胞两阶段培养生产灵芝酸的方法，可以高效率生产灵芝酸，产量1066mg/L，细胞内含量达5mg/100mg干重；中国发明专利申请公开说明书CN1264743A披露了一种液体好氧发酵-液体静置培养法生产灵芝酸的工艺，使总灵芝酸的产量较一般液体好氧发酵法产量提高了2.3倍；中国发明专利申请公开说明书CN101692772A披露了一种增加诱导剂提高细胞中灵芝酸含量的方法，使得灵芝菌丝体中总灵芝酸含量达到41.4mg/g干细胞，同时单体灵芝酸的含量也提高15％～60％。但是，灵芝酸在灵芝细胞中的含量仍然很低，分离纯化也较难，这限制了灵芝酸的活性及作用机理的研究及广泛应用。如何进一步提高灵芝酸的产量是目前急需解决的技术问题。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种灵芝细胞培养液及其应用，使得灵芝菌丝体中四种灵芝酸单体Mk，T，S，Me含量分别提高了4.5倍，6.2倍，33.1倍和7.1倍。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种种子培养液，其组分及含量为：葡萄糖35g/L、蛋白胨5g/L、酵母粉2.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、维生素B1 0.05g/L，余量为水。

本发明涉及一种氮限制发酵培养液，其组分及含量为：糖类20-35g/L、酵母粉0-2.5g/L、蛋白胨0-2.5g/L、谷氨酰胺0-8.76g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾0-2g/L、氯化钙0-0.05g/L、氯化钠0-0.2g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、维生素B10.5g/L，余量为水。

所述的糖类为：葡萄糖或乳糖；

所述的氮限制发酵培养液具体为以下组分中的任一一种：

1)乳糖35g/L、蛋白胨2.5g/L、酵母粉2.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、维生素B1 0.05g/L，余量为水；

2)乳糖35g/L、蛋白胨0.5g/L、酵母粉0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、维生素B1 0.05g/L，余量为水；

3)乳糖35g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、维生素B1 0.05g/L，余量为水；

4)葡萄糖20g/L、谷氨酰胺8.76g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾2g/L、氯化钙0.05g/L、氯化钠0.2g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、维生素B1 0.05g/L，余量为水；