[发明专利]抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，特别是涉及一种抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法。

背景技术

在抗血栓和体外抗凝血治疗中一般使用肝素，其广泛存在于肺、肝、脾等器官中，原料来源有限，价格昂贵、制备工艺复杂，而且有致出血的副作用。

壳聚糖具有良好的生物相容性，可自然降解，无毒、无刺激。由于壳聚糖分子结构中含有活性的氨基和羟基，极易对其改性，在生物医药领域已有广泛应用。壳聚糖硫酸酯是目前研究较多的壳聚糖衍生物类抗凝剂，但有轻微毒性，因此制备新型的壳聚糖基抗凝衍生物具有很重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法。我国蚕业资源丰富，蚕蛹易于制备高纯度、高脱乙酰度的医药级壳聚糖；另外，钙离子在多个凝血环节上都具有促凝血作用，是很多凝血因子的激活剂。基于以上两点，对用蚕蛹提取的壳聚糖分子进行修饰，把具有增加壳聚糖溶解性的基团—羧基等引入壳聚糖分子，并使引入的基团与壳聚糖自身的活性基团相互增效，达到增加溶解性，同时增强壳聚糖分子对钙离子的螯合性能，降低血液中钙离子含量从而达到抗凝的效果。

本发明的主要技术路线是首先将氨基酸制成含活性卤的反应中间体，然后再和蚕蛹壳聚糖反应，制得对钙离子具有螯合性能的壳聚糖氨基酸类衍生物。此类衍生物的通式为CS-B-R，其中，CS为从蚕蛹中提取的含有－NH₂和－OH等活性基团的壳聚糖分子；B为羟丙基、乙基等连接基；R为含有-NH、-COOH等能与钙离子络合的分子链段。

本发明一种抗凝血蚕蛹壳聚糖衍生物的制备方法，通过以下步骤实现：

（1）卤代氨基酸活性中间体的制备：

用适量的碱溶液调节氨基酸pH至 9.0~10.0制备氨基酸盐溶液，向氨基酸盐溶液中逐滴滴加环氧氯丙烷或1, 2 –二卤乙烷，保持40~60 ℃充分搅拌至反应液由乳浊液变为淡黄色澄清状，用盐酸中和至中性，经乙醇、丙酮重结晶后得到卤代氨基酸活性中间体；

（2）蚕蛹壳聚糖氨基酸类衍生物的制备：

将壳聚糖分散于质量比浓度为50%的氢氧化钠溶液中，壳聚糖与质量比浓度为50%的氢氧化钠溶液的质量体积比为1g：20mL，于-18 ℃条件下碱化24 h，滤去氢氧化钠，将碱化壳聚糖分散于大极性溶剂中，加入步骤（1）所得中间体的饱和水溶液，于50~80 ℃条件下搅拌反应3~6 h，过滤除去未反应的中间体，乙醇洗涤，真空干燥得蚕蛹壳聚糖的氨基酸衍生物；

上述方法步骤（1）所述的氨基酸为CH₂(NH₂)COOH、CH₃CH (NH₂)COOH或HOCH₂CH (NH₂)COOH；所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾或其任意组合任意比例的混合物；氨基酸与环氧氯丙烷或1, 2 –二卤乙烷的摩尔比为1 : 1~1 : 2，以1 : 1为佳。

上述方法步骤（2）所述的壳聚糖为蚕蛹壳聚糖，也可为虾、蟹壳壳聚糖；所述大极性溶剂为水或异丙醇或其任意比混合物；所述中间体与壳聚糖的摩尔比为1 : 1~1 : 5，以1 : 1为佳。

本发明合成的抗凝剂生物粗品可直接用于生物止血，也可经提纯后应用。

本发明的优点是，以蚕蛹提取的壳聚糖为原料，通过接枝对钙离子具有螯合作用的氨基(或胺基)和羧基，制备的壳聚糖氨基酸衍生物，可改善壳聚糖在水中的溶解性，避免壳聚糖在酸中溶解对人体造成的二次伤害，使抗凝剂对血液的抗凝率得到进一步提高。该方法原料来源广泛、价格低廉、制备简单，制备的产品无毒副作用。

具体实施方式

下面结合具体实例，进一步阐述本发明。这些实例仅用于说明本发明而不构成对本发明的限制。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1：

按1：1的摩尔比称取甘氨酸和环氧氯丙烷，用适量的氢氧化钠溶液中和甘氨酸至pH = 9.0，制得甘氨酸钠溶液加入到三角瓶中，向三角瓶中缓慢滴加环氧氯丙烷，同时充分搅拌，此时溶液为水油混合的乳浊液状，控制反应在50℃下进行，继续搅拌至溶液变为淡黄色澄清状，用盐酸中和至中性。经过乙醇、丙酮重结晶，旋转蒸发后得到中间体。