[发明专利]壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因工程领域，尤其涉及一种用于预防或治疗结核病的疫苗及其制备方法和应用，特别是一种壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗及其制备和应用。

背景技术

结核分枝杆菌感染导致的结核病的死灰复燃是当今全球重大的健康问题，由于人口密集度和流动性日益增加、常规BCG疫苗的无效性、结核耐药菌株的出现、以及AIDS病导致的结核并发感染，目前结核发病及死亡非常严重，全球每年有800万活动性结核患者并导致300万死亡；我国约有5.5亿人口曾经感染结核，每年13万人死于结核，每月约有12万新发病人。2006年结核已一跃成为我国感染性疾病发病的首位，研制新型结核预防疫苗非常迫切。

研究表明，结核分枝杆菌主要感染肺部巨噬细胞。诱导CD4+Th1细胞及其分泌的高水平的IFNγ，不仅能够增强巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，还可以通过促进CD8+CTL的诱导发挥特异性杀伤结核感染细胞，对于清除结核杆菌至关重要。基因疫苗或称DNA疫苗，是将外源目的基因构建于真核表达质粒、直接注射动物的第三代疫苗，由于可在体内表达目的抗原，通过外源性、内源性以及交叉抗原提呈激活DC细胞，有效激活CD4+Th1和CD8+T细胞，因此特别有利于诱导Th1型免疫应答。

然而，在机体的什么部位诱导Th1型免疫应答同样是一个关键问题，虽然诱导脾脏和淋巴结(全身性)Th1型免疫应答是传统疫苗的重点，但是，有关抗粘膜感染病原体免疫的国际前沿研究表明：诱导肺粘膜局部的粘膜T细胞免疫应答对于清除粘膜感染病原体更为重要。结核杆菌主要通过呼吸道粘膜入侵机体，粘膜免疫是人体免疫的第一道防线，可在感染的早期和最初感染部位有效控制感染，防止感染扩散。诱导呼吸道和肺部特异性粘膜免疫应答，可有效控制结核早期感染，防止细菌播散，因此诱生特异性粘膜免疫成为新型结核疫苗研制的热点和重点。通过呼吸道给予粘膜疫苗可更好地模拟结核杆菌天然感染，诱导特异性粘膜免疫，在粘膜感染的第一时间清除病原体，产生更为有效的抗结核免疫保护作用。

然而，粘膜部位接种抗原通常很难诱导免疫应答，由于粘膜局部纤毛的频繁摆动、粘膜局部水解酶、DNA酶的大量存在，使得外来抗原迅速降解，不足以被APC提呈。因此需要通过粘膜递送系统来对DNA疫苗进行组装，而后行粘膜免疫。

因此，申请人以已公开的基于T细胞表位的结核基因疫苗(基于T细胞表位的结核基因疫苗及其制备方法和应用。专利申请号：200710171416.X)为基础，以一种特定性质的天然多糖------壳寡糖(oligo-chitosan)通过共聚沉淀的方法与结核基因疫苗形成壳寡糖-DNA纳米颗粒复合物，而后进行滴鼻免疫，诱导结核特异性全身和肺部粘膜Th1型细胞免疫应答。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗及其制备和应用，所述的这种壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗要解决现有技术中由于常规BCG疫苗的无效性、以及结核耐药菌株的出现和AIDS病导致的结核并发感染使得现有疫苗预防和治疗结核病的效果不佳的技术问题。