[发明专利]一种小分子非编码RNA基因hsa-miR-29b及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种RNA及其应用，尤其涉及一种小分子非编码RNA及其应用。

背景技术

癌症(恶性肿瘤)已成为一个全球性公共健康问题，在我国尤为突出。卫生部报道，中国城乡居民的癌症死亡率在过去30年中增长了八成以上。目前，癌症已经成为中国城市居民的首位死因和农村居民的第二位死因。其中，原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发生率和死亡率均高居各种恶性肿瘤前列。中国是肝癌的高发区，占全世界HCC患者总数的55％。现今恶性肿瘤主要的治疗方法以根治性切除为主，癌症难以根治的主要原因是局部复发和远处转移，转移癌是肿瘤复发的主要原因。众所周知，血行转移是肿瘤转移的主要途径，所以以血管生成为治疗靶标可以有效抑制肿瘤转移，这也是目前肿瘤学研究亟待解决的问题。恶性肿瘤都是高度血管化的，血管生成在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。新生的血管不仅为肿瘤细胞提供营养，也为肿瘤细胞的扩散和转移提供了渠道，故抗血管生成是一种有效的抗肿瘤方法。一些抑制血管生成的药物，如多吉美，已经广泛应用于抗肝癌。

小分子非编码RNA，也称微小RNA(microRNA)，是广泛存在于各种生物体内的一类小分子非编码的核糖核酸，长度约为20-22个碱基。它通过碱基配对识别靶基因信使RNA(mRNA)的3’端非翻译区(3’UTR)，促进靶基因降解或抑制其翻译来实现对基因表达的负调控，从而参与了细胞的多种生物学过程。多个证据表明，microRNA的异常表达和功能失调直接影响着恶性肿瘤的发生发展。

现有研究发现，一种命名为hsa-miR-29b的小分子非编码RNA的表达在肝细胞肝癌组织标本中普遍下调，并且hsa-miR-29b表达低的患者无瘤生存时间显著较短，提示其与肝癌复发相关。而现有的国内外文献中至今未见有关hsa-miR-29b与肿瘤血管生成的研究报道。进一步研究hsa-miR-29b在肿瘤血管生成中的作用，对于制备新型抗血管生成、抗血行转移和抗肿瘤药物意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小分子非编码RNA基因，该基因命名为hsa-miR-29b，其序列如序列表<400>1序列所示。

本发明的另一目的在于提供hsa-miR-29b在制备抑制肿瘤细胞促血管生成药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供hsa-miR-29b在制备抗肿瘤血管生成药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供hsa-miR-29b在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供hsa-miR-29b在制备抗肿瘤血行转移中的应用。

本发明通过体外管形成实验研究hsa-miR-29b在体外恢复表达对肿瘤细胞促血管生成功能的作用。体外管形成实验是在体外模拟血管内皮细胞在体内形成管腔结构的实验，通过管状结构的节点数来评估人脐静脉内皮细胞HUVEC出芽能力并表征人脐静脉内皮细胞HUVEC的血管生成能力。

上述体外管形成实验设A、B、C、D、E五个实验，上述五个实验内均设置空白对照组、阴性对照组和实验组。

步骤一：利用目的RNA转染肿瘤细胞株，使目的RNA在肿瘤细胞株内恢复表达，空白对照组的肿瘤细胞株不转染任何RNA；

上述目的RNA为hsa-miR-29b、hsa-miR-29b的反义核苷酸(也称为anti-hsa-miR-29b)、阴性对照RNA(也称为NC)、阴性对照RNA的反义核苷酸(也称为anti-NC)其中的一种。

上述肿瘤细胞株为肝细胞肝癌细胞株LM6(简称LM6)、肝细胞肝癌细胞株H2M(简称H2M)、肺巨细胞癌细胞株95D(简称95D)或结肠腺癌细胞株HCT116(简称HCT116)其中的一种。

上述NC序列为UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT。

步骤二：收集步骤一的肿瘤细胞培养上清孵育人脐静脉内皮细胞HUVEC，孵育后在显微镜下观察人脐静脉内皮细胞HUVEC网状结构的生成情况。

实验A：

空白对照组：加入未经转染的LM6肿瘤细胞培养上清；

阴性对照组：加入NC的LM6肿瘤细胞培养上清；

实验组：加入转染hsa-miR-29b的LM6肿瘤细胞培养上清；

实验B：

空白对照组：加入未经转染的H2M肿瘤细胞培养上清；

阴性对照组：加入转染NC的H2M肿瘤细胞培养上清；