[发明专利]多肽CW7213纯化工艺方法

权利要求书

1.一种化学合成多肽的分离纯化方法，其特征在于：

①利用固相多肽合成方法合成多肽，将得到的粗肽加入纯水，温度保持在20-40度，用超声波振荡10-30分钟进行溶解；完全溶解后，膜过滤得到澄清溶液，得到CW7213的粗肽溶液，再先后进行离子交换色谱和反向高效液相色谱的分离纯化；

②离子交换色谱分离，采用粒径为5μm的离子交换色谱填料，流动相为磷酸盐缓冲液与高氯酸钠磷酸盐缓冲液体系，流速1ml/min；

③反相制备液相色谱分离，采用粒径为5μm的反向液相色谱填料，流动相为含三氟乙酸的甲醇/水溶液体系，流速2ml/min；

④转盐，采用粒径为5μm的反相液相色谱填料，流动相为含醋酸的甲醇/水溶液体系，流速2ml/min；

⑤将各收集组分，质谱分析目标产物，然后冷冻干燥，得到多肽成品。

2.根据权利要求1所述的化学合成多肽的分离纯化方法，其特征在于所述的离子交换色谱缓冲液体系为A液：50％乙腈+50％含0.1mol/L KH₂PO4的磷酸水溶液PH3.3；B液：50％乙腈+50％含0.1mol/L KH₂PO₄，0.1mol/L NACLO₄的磷酸水溶液PH3.3；洗脱条件为0％-60％B液30min。

3.根据权利要求1所述的多肽的分离纯化方法，其特征在于所述的反相制备液相色谱的流动相体系为A液：5％甲醇+水相中0.05％三氟乙酸，B液：95％甲醇+水相中0.05％三氟乙酸；流速为2ml/min；洗脱条件为40％-50％B液30min。

4.根据权利要求1所述的化学合成多肽的分离纯化方法，其特征在于所述的离子交换色谱柱为Waters Spherisorb SCX 4.6×250mm。

5.根据权利要求1所述的化学合成多肽的分离纯化方法，其特征在于所述的反相C18柱为Kromasil C18 10×250mm。。

6.根据权利要求1所述的化学合成多肽的分离纯化方法，其特征在于所述的转盐流动相体系为A液：2％醋酸+纯水，B液：甲醇；流速为2ml/min；洗脱条件为40％-60％B液30min。