[发明专利]一种丙型肝炎病毒完整结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒

说明书

技术领域

本发明涉及病毒、组合物及其制备或纯化领域，特别涉及以引入外来基因材料修饰的病毒领域。

背景技术

目前全世界范围内，大约有1.7亿人感染了丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)。丙型肝炎病毒是经血液传播的、引起急/慢性肝炎的主要致病因子之一，全球各地HCV感染流行状况差异较大，以发展中国家最为严重。丙型肝炎病毒感染者中50-85％发展成为慢性肝炎，其中10-20％进一步发展为诸如肝硬化等复合慢性肝病，1-5％的病人在二三十年后发展为肝癌。然而，目前对丙型肝炎病毒感染仍缺乏十分有效的治疗药物，更严峻的是，迄今全球还没有丙肝预防性疫苗。直到今天丙型肝炎的研究也还没有取得突破性的进展，关键因素是由于丙型肝炎病毒只能感染人类和黑猩猩，因此缺乏理想的丙型肝炎病毒感染小型灵长类动物模型，极大地限制了丙型肝炎病毒免疫防治的研究。

丙型肝炎病毒是一种黄病毒科肝病毒属的病毒，其基因组由结构(核心，囊膜)和非结构(蛋白酶，螺旋酶，酶辅助因子)蛋白及非编码区组成。丙型肝炎病毒核心蛋白(Core)为病毒核衣壳的重要组成部分，与糖蛋白作用组装出完整的HCV病毒颗粒，可以通过与病毒RNA的结合来调节HCV基因组的翻译，具有基因调控作用，可以参与HCV感染后的免疫调控。囊膜蛋白(E)二聚体(E1E2，含p7蛋白)直接介入与宿主细胞的相互作用，并诱导机体产生中和抗体和特异性细胞免疫，是主要的保护性抗原。然而，自然感染(野生)毒株尚不能细胞培养，特别是尚无有效的小型灵长类动物感染模型模拟真实的丙型肝炎病毒感染，极大地限制着丙型肝炎病毒免疫研究。

现有技术中，利用嵌合病毒的研究已见于HCV/HIV、HCV/VSV、HCV/YFV、HCV/CSFV、HCV/BVDV和HCV/PV。这些构建的HCV嵌合病毒或称伪病毒(pseudotype virus)主要用于丙型肝炎病毒蛋白与细胞的相互作用、中和抗体测定，以及基因调控等研究。由于这些骨架病毒均无嗜肝细胞性，故不能用于丙型肝炎疫苗免疫防治研究。

GB病毒B(GBV-B)是一种最近似丙型肝炎病毒，同属黄病毒科肝病毒属的病毒。与丙型肝炎病毒不同，GB病毒B可在小型灵长类动物狨猴common marmoset(Callithrix jacchuejacchus)和小娟猴(Tamarin，Saguinus spp)体内复制并导致急或慢性肝炎。但是GB病毒B仍然与丙型肝炎病毒存在差异，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的感染和免疫状态，因此，如果以GB病毒B基因组为骨架，以丙型肝炎病毒的功能基因取代GB病毒B的相应功能区，构建HCV/GBV-B嵌合病毒，则是利用感染模型研究丙型肝炎病毒免疫的理想方案。然而，由于将丙型肝炎病毒的完整功能蛋白基因替换到GB病毒B基因组中存在一定的困难，并且构建的含完整功能蛋白的嵌合病毒是否能够感染小型灵长类动物存在不确定性和风险性，因此，目前利用HCV/GBV-B嵌合病毒的研究仅见于将较小基因片段的丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替换到GB病毒B基因组中，这些只包含了丙型肝炎病毒很短基因片段的嵌合病毒只能用于研究这些特定基因片段的功能，无法表明丙型肝炎病毒与宿主之间的相互作用，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的免疫反应。上述将丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替换到GB病毒B基因组中的方案，参见Rijnbrand，R.et al.Achimeric GB virus B with 5’nontranslated RNA sequence from hepatitis C virus causeshepatitis in tamarins.Hepatology.41，986-994(2005)、Takikawa，S.et al.Functionalanalyses of GB virus B p13 protein：Development of a recombinant GB virus B hepatitisvirus with a p7 protein.Proc Natl Acad Sci USA.103，3345-3350(2006)、Haqshenas，G.，Dong，X.，Netter，H.，Torresi，J.&Gowans，E.J.A chimeric GB virus B encodingthe hepatitis C virus hypervariable region 1 is infectious in vivo.J.Gen.Virol.88，895-902(2007).和Griffin，S.et al.Chimeric GB virus B genomes containinghepatitis C virus p7 are infectious in vivo.J.Hepatol.49，908-915(2008)等文献的报导。