[发明专利]一种咖啡酊中生物碱的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物碱的检测方法，具体是一种咖啡酊中生物碱的测定方法，可同时检测咖啡酊中咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸3种生物碱。

背景技术

咖啡酊是用一定浓度的乙醇自经烘烤处理后的咖啡种子浸提而制得。产品会有多种生物碱和其它杂环化合物，还含有糠醇、硫衍生物和少量挥发酸。具有典型的芳香和苦的香味等感官特性，添加到卷烟中能增浓香气，增加烘烤香，味变苦。

咖啡豆中的主要植物碱为咖啡因，在生咖啡豆中的含量随品种的不同而变化，其具有明显的苦味，对人体具有显著的生理作用。胡芦巴碱和烟碱酸是咖啡豆中另外两种生物碱。胡芦巴碱具有低程度的生理作用，在焙炒过程中会分解生成多种化合物，包括烟碱酸。烟碱酸在生咖啡豆中的含量很少，在焙烧过程中来自胡芦巴碱的分解，其本身也会继续分解。

目前，咖啡酊中这3种生物碱的同时测定尚未见报道。

发明内容

本发明的目的正是基于上述状况而提供的一种咖啡酊中三种生物碱的测定方法，填补了咖啡酊中同时分析检测咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸3种生物碱的空白。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：咖啡酊中生物碱的测定方法如下：以水为样品稀释溶剂，甲醇与0.1%甲酸水溶液的混合液为流动相采用高效液相色谱法同时对咖啡酊中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。

具体测定步骤如下：

（1）标准工作曲线制定：在4.25×10^-4-0.17mg/mL范围内用甲醇配制胡芦巴碱标准品的至少五个浓度的标准溶液，在3.33×10^-4-0.26mg/mL范围内用甲醇配制尼古丁酸标准品的至少五个浓度的标准溶液，在2.75×10^-4-0.22mg/mL范围内用甲醇配制咖啡因标准品的至少五个浓度的标准溶液，再利用高效液相色谱仪分别对上述所有浓度的标准溶液中的三种标准品的含量进行检测，并根据三种标准品的峰面积和相应的浓度分别绘制三种标准品的标准工作曲线并计算得到其回归方程；

（2）样品制备：称取0.100g咖啡酊剂于10mL容量瓶中用水稀释定容，超声5min，经0.45μm水相滤膜过滤后使用，再利用高效液相色谱仪采用与步骤（1）相同的条件分别对样品溶液进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线的回归方程中，计算出样品中的咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸含量。

高效液相色谱分析条件如下：

色谱柱： waters C18分析柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）；

流动相：流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为甲醇；

梯度洗脱条件：2%B开始，5min后10%B,12min后50%B,15min后100%B,保持5min,21min以2%B平衡柱子4min。分析时间共25min；

流速1mL/min；柱温30℃；检测波长：265nm。

在上述条件中，以水为样品稀释溶剂以及以0.1%甲酸水为流动相是本方法的关键。以水为样品稀释溶剂，不仅能够减小样品中色素进入色谱柱中的量，有效保护色谱柱，而且样品前处理溶剂环保无毒，并且对生物碱的色谱峰形没有影响。与纯水为流动相相比，0.1%甲酸水为流动相能有效改善尼古丁酸的色谱峰形，有利于尼古丁酸的准确定量。

本方法前处理简单，咖啡酊剂直接用水稀释定容，超声5min，经0.45μm水相滤膜过滤后使用，无需进一步进行样品净化步骤。利用本发明方法对咖啡酊中三种生物碱进行测定，重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。

 

附图说明

图1为咖啡因、胡芦巴碱和尼古丁酸标样色谱图。

图2为咖啡酊样品色谱图。

图中：1为胡芦巴碱，2为尼古丁酸，3为咖啡因。

具体实施方式：

下面通过实施实例对本发明进行进一步说明：

色谱条件：Agilent 1200液相色谱，配置二极管阵列检测器，检测波长265nm。色谱柱：waters C18分析柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）。流动相：0.1%甲酸水（A）,甲醇(B)；梯度洗脱，2%B开始，5min后10%B,12min后50%B,15min后100%B,保持5min,21min以2%B平衡柱子4min。流速1mL/min。分析时间共25min。柱温30℃。

1）标准工作曲线的制定：