[发明专利]一种具有高效转糖基β-半乳糖苷酶的新基因及应用

权利要求书

1.一种β-半乳糖苷酶，其特征是：它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种β-半乳糖苷酶，其特征是：它的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求1或2所述的β-半乳糖苷酶的宏基因组学克隆方法，其特征是：提取海底泥的总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经BamHI酶切，连接到克隆载体PΔLacZ上，电击转化大肠杆菌DH5α高效感受态建立宏基因组文库，通过涂布含X-gal的LB平板显色法快速筛选得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段。

4.一种表达载体，其特征是：所述的表达载体含有权利要求1或2所述的β-半乳糖苷酶基因。

5.一种重组β-半乳糖苷酶的制备方法，其特征是：包括用权利要求4所述的表达载体转化宿主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组β-半乳糖苷酶。

6.根据权利要求5所述的重组酯酶的制备方法，其特征是：其中宿主细胞是大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的重组β-半乳糖苷酶的制备方法，其特征是：其具体过程为：包括用权利要求4所述的表达载体的目的片段经BamHI、HindIII双酶切，与pET-32a(+)载体连接，转化至大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，得到高效可溶性表达。

8.根据权利要求7所述的重组β-半乳糖苷酶的制备方法，其特征是：所述的IPTG终浓度为0.6-1.8mM，诱导温度为18-37℃。

9.一种重组β-半乳糖苷酶，其特征是：包括用权利要求4所述的表达载体转化的宿主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组β-半乳糖苷酶的步骤的方法制备。

10.权利要求9所述的重组酯酶在将乳糖高效转化为低聚半乳糖混合物中的应用。