[发明专利]癌症诊断方法及其用途

权利要求书

1.一种方法，其用于诊断癌症或与其相关的残余病症，或者用于预后癌症，或者用于监测针对癌症的抗肿瘤治疗的有效性，或者用于对患有癌症的个体进行随访监测，其包括：

(i)将分离的成体干细胞与分离的血衍生物样品接触；

(ii)验证所述干细胞中至少一种上皮标志物的表达。

2.权利要求1的方法，其中所述癌症选自：结肠直肠癌，胃癌，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，肝癌，卵巢癌，肾癌，甲状腺癌，膀胱癌或胰腺癌。

3.权利要求1或2的方法，其中所述分离的血衍生物样品是血清或血浆。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述干细胞是多能干细胞，并且优选选自：间充质干细胞，CD133⁺细胞，CD44⁺细胞，CD90⁺细胞，CD29⁺细胞，CD105⁺细胞，CD117⁺细胞，CD56⁺细胞和CD73⁺细胞。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述上皮标志物为细胞角蛋白，优选为CK-18，CK-19，CK-20或CK-21，更优选为CK-19。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中将干细胞与血衍生物样品接触的所述步骤(i)包括：将所述干细胞接种于支持物上的步骤和将所述样品在用于干细胞的培养基中稀释的步骤。

7.权利要求6的方法，其中血衍生物样品在细胞培养基中的所述稀释在1∶2至1∶20之间变化，优选为1∶4至1∶8。

8.权利要求6或7中任一项的方法，其中所述的在培养基中稀释的样品被添加至所述干细胞。

9.权利要求8的方法，其中所述干细胞在稀释于培养基的样品中生长一段时间，所述时间段在48到180小时之间变化，优选90至150小时。

10.前述权利要求任一项的方法，其中所述验证至少一种上皮标志物的表达的步骤通过下列来进行：免疫荧光法，免疫组织化学，ELI SA或RT-PCR；优选地，PCR是实时的。

11.权利要求10的方法，其中所述通过ELISA测定至少一种上皮标志物的表达的步骤包括以下步骤：

●裂解已接触血衍生物样品的干细胞；

●将先前步骤中获得的蛋白裂解物的等分试样与抗上皮标志物的至少一种抗体接触，优选地，所述抗体吸附在适当的支持物上；以及

●测定至少一种上皮标志物和所述抗体的结合。

12.权利要求10的方法，其中所述通过免疫荧光法测定至少一种上皮标志物的表达的步骤包括以下步骤：

●将已接触所述血衍生物样品的干细胞固定于玻片上；

●将先前步骤中固定的细胞与抗上皮标志物的至少一种抗体接触；以及

●测定由分化的干细胞表达的至少一种上皮标志物与所述抗体的结合。

13.权利要求10至12中任一项的方法，其中所述测定至少一种上皮标志物的表达的步骤，在从细胞去除所述稀释于培养基的血衍生物样品后实现。

14.权利要求1至10中任一项的方法，其中监测针对癌症的抗肿瘤治疗的有效性包括，比较患病个体在所述个体所接受的治疗性治疗的不同阶段的分离的样品中，至少一种上皮标志物的表达水平。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法的特征在于，其特异性为60％至100％，优选70％至90％。

16.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法的特征在于，其灵敏度为60％至100％，优选70％至90％。

17.用于实施权利要求1-16中任一项的方法的试剂盒，其包括：

●抗上皮标志物的至少一种抗体，其中所述抗体优选地缀合有荧光染料或者酶，或者用于扩增至少一种上皮型标志物的至少一对寡核苷酸；和/或

●干细胞样品；和/或

●用于培养所述干细胞的培养基。

18.权利要求17的试剂盒，其中所述抗体抗细胞角蛋白，优选细胞角蛋白18，细胞角蛋白19，细胞角蛋白20或细胞角蛋白21，更优选细胞角蛋白19。