[发明专利]用于预防或治疗宫颈癌的、包含人乳头瘤病毒变形体及免疫增强剂的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及用于预防或治疗宫颈癌的、包含人乳头瘤病毒（human papillomavirus; HPV）变形体及免疫增强剂的组合物。更具体地，融合蛋白通过诱导HPV16和18型抗原特异性免疫应答治疗由HPV引起的肿瘤。所述融合蛋白包括融合多肽（Polypeptide）、信号肽及免疫增强肽，所述融合多肽被重组，以使作为人乳头瘤病毒16和18型的抗原E6、E7的三维结构变形。

背景技术

众所周知，宫颈癌（cervical cancer）是由于受人乳头瘤病毒16和18型等的高危型人乳头瘤病毒的感染而引起的疾病（zur Hausen, H et al. Biochem Biophys Acta 1996, 1288; F55-F78, Mark H et al. J Natl Cancer Inst 1993, 85; 958-964）。在HPV蛋白中E6、E7蛋白对宫颈癌的发病起主要作用，而且已确认在宫颈癌患者的肿瘤组织中表达99%，从而成为制备用于治疗和预防宫颈癌的疫苗的主要靶物质（von Knebel Doeberitz et al. Int. J. Cancer 1992, 51; 831-834）。E6与已知用作肿瘤抑制蛋白p53结合，通过促进p53的分解，用细胞凋亡(apoptosis)途径阻止细胞周期的进行。E7与作为肿瘤抑制因子的视网膜母细胞瘤蛋白pRb（retinoblastoma protein）结合，通过使之失活并促进其分解，诱导细胞周期进入S期(Cobrinik et al., Trends Biochem Sci 1992, 17:312-5)。

然而，为治疗宫颈癌，在使用通过同时表达HPV16的 E6、E7蛋白的核酸序列的组合物的临床试验中，其疗效并不显著(Garcia F et al. Obstet Gynecol 2004, 103; 317-326)。此结果表明，仅施用HPV抗原是无法发生足以治疗或抑制宫颈癌的抗原特异性免疫应答的。

因此，为治疗子宫癌，需增强E6、E7的免疫原性（immunogenicity），并且需消除所述蛋白的致癌能力。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于，提供用于预防或治疗由HPV引起的疾病的新型融合蛋白及编码所述融合蛋白的多核苷酸（polynucleotide）。所述融合蛋白可抑制HPV E6、E7蛋白的致癌能力并展现增强的免疫原性。

本发明的另一个目的在于，提供表达所述融合蛋白的重组载体（recombinant vector）、包含所述载体的宿主细胞以及用所述宿主细胞表达融合蛋白的方法。

本发明的另一个目的在于，提供用所述融合蛋白的、用于预防或治疗由HPV引起的疾病的组合物。

本发明的另一个目的在于，提供用所述组合物的、用于预防或治疗由HPV引起的疾病的方法。

技术方案

为达到上述目的，一方面，本发明提供融合蛋白，该融合蛋白包括：融合多肽，即三维结构变形的、源于人乳头瘤病毒16和18型并包含SEQ ID NO：1氨基酸序列的E6、E7；用于分泌所述融合多肽的信号肽；和免疫增强肽。

另一方面，本发明提供多核苷酸，该多核苷酸用于编码本发明的融合蛋白。

另一方面，本发明提供重组载体，该重组载体包括本发明的多核苷酸。

另一方面，本发明提供宿主细胞，该宿主细胞由本发明的重组载体转化而成。

另一方面，本发明提供用于表达本发明的融合蛋白的方法，该方法是通过培养本发明的经转化的宿主细胞完成的。

另一方面，本发明提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的组合物，该组合物包括作为活性成分的、选自本发明的融合蛋白、由表达所述融合蛋白的重组载体转化而成的宿主细胞及其均浆（homogenate）中的一种或多种的物质。

另一方面，本发明提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的方法，该方法包括向需要者施用有效剂量的本发明的组合物的步骤。

有益效果