[发明专利]T细胞受体

说明书

本发明涉及结合EVDPIGHLY肽(源自MAGE-3蛋白)的T细胞受体(TCR)，所述肽以肽-HLA-A1复合体形式存在，所述TCR相对天然MAGE-A3 TCRα和/或β可变结构域进行突变，且对所述复合体所具有的结合亲和力和/或结合半衰期至少两倍于参比MAGE-A3 TCR。

背景技术

所述EVDPIGHLY(SEQ ID No:1)肽对应已知MAGE-3蛋白的氨基酸残基168-176。所述MAGE-3蛋白在多种肿瘤类型中有表达，包括黑色素瘤，以及其他固体肿瘤如头颈部鳞状细胞癌、肺癌、膀胱癌、胃癌和食道癌。所述MAGE-3肽EVDPIGHLY(SEQ ID No:1)是鉴定最充分的MAGE-3表位。它由HLA-A1和HLA-B35限制性T细胞识别。它能诱发细胞毒性抵御肽冲击，HLA-A1阳性靶细胞和MAGE-3-表达型HLA-A1阳性黑色素瘤细胞系。所述肽用作疫苗已表明可在一些患者中诱导肿瘤消退和诱发CTL反应。

因此，所述EVDPIGHLY HLA-A1复合体提供了本发明所述TCR可靶向的癌症标志物。比如，本发明的TCR可以转入T细胞内使其可以破坏呈递该HLA复合体的肿瘤细胞，用于在称作过继治疗的治疗过程中施于患者。为此，需要所述TCR相比所述肽-HLA复合体的特异性天然TCR而言对该复合体具有更高的亲和力和/或更低的解离速率。亲和力显著增加伴有TCR基因修饰的CD8T细胞丧失抗原特异性，这会导致非特异性激活这些TCR转染的CD8T细胞，因此过继治疗优选的TCR相比所述肽-HLA复合体的特异性天然TCR而言对该复合体的亲和力稍高和/或解离速率稍低，而非对所述肽-HLA复合体的亲和力显著高于和/或解离速率显著低于天然TCR(见Zhao等(2007)J Immunol.179:5845-54;Robbins等(2008)J Immunol.180:6116-31；也可见已公开的WO2008/038002)。

TCR采用国际免疫遗传学(IMGT)TCR命名法进行表述，并与TCR序列的IMGT公开数据库相链接。天然α-β杂二聚体TCR具有α链和β链。宽泛地，每个链包括可变区、连接区和恒定区，β链还通常在可变区和连接区之间含有短的多变区，不过该多变区常被视为连接区的一部分。每个可变区包括嵌于构架序列中的三个CDR(互补决定区)，一个是名为CDR3的高变区。共有几种类型的α链可变区(Vα)和几种类型的β链可变区(Vβ)，通过它们的构架，CDR1和CDR2序列，以及部分限定的CDR3序列进行区分。Vα类型在IMGT命名法中通过特有的TRAV数来定名。因此，“TRAV21”限定义的TCR Vα区具有独特的构架、CDR1和CDR2序列，以及部分由TCR相互之间保守的氨基酸序列限定但还包括TCR相互之间有变化的氨基酸序列的CDR3序列。同样地，“TRBV5-1”限定的TCR Vβ区具有独特的构架、CDR1和CDR2序列，以及仅部分限定的CDR3序列。

所述TCR的连接区类似地由特有的IMGT TRAJ和TRBJ命名法限定，而恒定区由IMGT TRAC和TRBC命名法限定。

β链多变区在IMGT命名法中由缩略语TRBD定名，并如提到的，连接好的TRBD/TRBJ区常一起被视为连接区。

一般认为αβTCR的α和β链各自含有两个“结构域”，即可变和恒定结构域。可变结构域由可变区和连接区的连接体组成。因此，本发明说明书和权利要求中，术语“TCRα可变结构域”指TRAV和TRAJ区的连接体，而术语TCRα恒定结构域指胞外TRAC区，或指C端截短的TRAC序列。类似的，术语“TCRβ可变结构域”指TRBV和TRBD/TRBJ区的连接体，而术语TCRβ恒定结构域指胞外TRBC区，或指C端截短的TRBC序列。

由IMGT命名法限定的特有序列已为TCR领域相关人员熟知并可获取。例如，可在IMGT公共数据库中找到这些序列。“T cell Receptor Factsbook(《T细胞受体丛书》)”(2001)LeFranc和LeFranc,学术出版社(Acadamic Press),ISBN0-12-441352-8也公开了由IMGT命名法定义的序列，不过因为它的发表日期和时间间隔，有时需要通过参考IMGT数据库来确认信息。