[发明专利]用于快速检测嗜肺军团菌的组合物和方法

权利要求书

1.分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO：1-15中任何一个具有至少85％同一性的序列或其互补物。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO：1-15中任何一个具有至少90％、95％或99％同一性的序列或其互补物。

3.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸分子与嗜肺军团菌23S rRNA或编码23S rRNA的DNA杂交。

4.捕获探针，包括：

a)核酸分子，其包含与SEQ ID NO：1-6中任何一个具有至少85％同一性的序列或其互补物，和

b)亲和标记。

5.权利要求4的捕获探针，其中所述亲和标记包括生物素。

6.权利要求4的捕获探针，其中所述亲和标记通过间隔核酸缀合到所述核酸分子的5’端。

7.适于嗜肺军团菌23S rRNA或编码23S rRNA的DNA的聚合酶链反应(PCR)扩增的引物，其包含选自SEQ ID NO：1、7、12、和13中任一个序列。

8.适于扩增23S rRNA或编码23S rRNA的DNA的引物组，其包含：

i)包含与SEQ ID NO：1具有至少85％同一性的正向引物，以及包含与SEQ ID NO：7具有至少85％同一性的反向引物，或

ii)包含与SEQ ID NO：12具有至少85％同一性的正向引物，以及包含与SEQ ID NO：13具有至少85％同一性的反向引物。

9.分离的核酸分子，其通过利用权利要求7的引物组之一，PCR扩增嗜肺军团菌23S rRNA或编码23S rRNA的DNA而产生。

10.权利要求9的分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO：16或SEQID NO：17序列具有至少85％同一性的序列。

11.检测探针，其包括：

a)核酸分子，其包含与SEQ ID NO：8、9、10、11、14、或15中任何一个具有至少85％同一性的序列或其互补物，和

b)可检测的标记。

12.权利要求11的检测探针，其中所述探针与权利要求9或10的分离的核酸分子杂交。

13.权利要求11的检测探针，其中所述可检测的标记包括荧光团。

14.权利要求13的检测探针，还包括通过荧光共振能量转移(FRET)与荧光团相互作用的猝灭剂。

15.权利要求14的检测探针，其用于实时PCR，其中所述荧光团连接于所述核酸分子的5’端，以及所述猝灭剂连接于所述核酸分子的3’端。

16.用于检测嗜肺军团菌的试剂盒，其包含权利要求8的引物组之一及其使用说明书。

17.权利要求16的试剂盒，还包括权利要求11-15中任一项的一个或多个检测探针。

18.权利要求16或17的试剂盒，还包括权利要求4-6中任一项的一个或多个捕获探针。

19.用于检测样品中嗜肺军团菌的存在情况的方法，其包括：

a)提供疑似含有靶核酸的样品，所述靶核酸含有嗜肺军团菌23S rRNA或编码23S rRNA的DNA；

b)将所述样品与引物组接触，所述引物组含有：

i)包含与SEQ ID NO：1具有至少85％同一性的正向引物，以及包含与SEQ ID NO：7具有至少85％同一性的反向引物，或

ii)包含与SEQ ID NO：12具有至少85％同一性的正向引物，以及包含与SEQ ID NO：13具有至少85％同一性的反向引物；

c)用所述正向引物和反向引物扩增所述靶核酸以产生靶核酸扩增产物；

d)检测所述靶核酸扩增产物的存在情况，其中所述靶核酸扩增产物的存在情况表明样品中嗜肺军团菌的存在情况。

20.权利要求19的方法，其中在步骤c)中使用聚合酶链反应扩增所述靶核酸。

21.权利要求19的方法，还包括在扩增所述靶核酸之前，将所述样品与逆转录酶接触以产生编码23S rRNA的cDNA。