[发明专利]用于纯化多肽多聚体的多肽的修饰方法

权利要求书

1. 多肽多聚体的制备方法，所述多肽多聚体包含具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽，该方法包括：

(a)使编码具有抗原结合活性的第1多肽的DNA、和编码具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽的DNA表达的步骤；以及

(b)回收步骤(a)的表达产物的步骤，

其中，在具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽的双方或任一方中有一个或多个氨基酸残基被修饰，使具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽与蛋白A的结合力产生差异。

2. 权利要求1所述的方法，其中，在步骤(b)中，利用蛋白A亲和层析来回收表达产物。

3. 权利要求1或2所述的方法，其中，在具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽的双方或任一方中有一个或多个氨基酸残基被修饰，使从蛋白A上洗脱具有抗原结合活性的第1多肽的溶剂的pH、和从蛋白A上洗脱具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽的溶剂的pH产生差异。

4. 权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在具有抗原结合活性的第1多肽、或者具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽中有一个或多个氨基酸残基被修饰，使具有抗原结合活性的第1多肽、或者具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽中的任一方与蛋白A的结合力增强或降低。

5. 权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，在具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽中有一个或多个氨基酸残基被修饰，使具有抗原结合活性的第1多肽、或者具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽中的任一方的多肽与蛋白A的结合力增强、使另一方的多肽与蛋白A的结合力降低。

6. 权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，回收的多肽多聚体的纯度为95%以上。

7. 权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性或不具有抗原结合活性的第2多肽包含抗体Fc区或抗体重链恒定区的氨基酸序列。

8. 权利要求7所述的方法，其中，选自抗体Fc区或抗体重链恒定区的氨基酸序列中的EU编号第250～255位、第308～317位和第430～436位的至少一个氨基酸残基被修饰。

9. 权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，具有抗原结合活性的第1多肽、和具有抗原结合活性的第2多肽包含抗体重链可变区的氨基酸序列。

10. 权利要求9所述的方法，其中，在抗体重链可变区的FR1、CDR2和FR3的氨基酸序列中有至少一个氨基酸残基被修饰。

11. 权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，多肽多聚体包含一个或两个具有抗原结合活性的第3多肽，步骤(a)包括使编码该具有抗原结合活性的第3多肽的DNA表达。

12. 权利要求11所述的方法，其中，具有抗原结合活性的第3多肽包含抗体轻链的氨基酸序列。

13. 权利要求11或12 所述的方法，其中，多肽多聚体进一步包含具有抗原结合活性的第4多肽，步骤(a)包括使编码该具有抗原结合活性的第4多肽的DNA表达。

14. 权利要求13所述的方法，其中，具有抗原结合活性的第3多肽和第4多肽中有至少一个多肽包含抗体轻链的氨基酸序列。

15. 权利要求13所述的方法，其中，具有抗原结合活性的第1多肽包含抗体轻链可变区和抗体重链恒定区的氨基酸序列，具有抗原结合活性的第2多肽包含抗体重链的氨基酸序列，具有抗原结合活性的第3多肽包含抗体重链可变区和抗体轻链恒定区的氨基酸序列，具有抗原结合活性的第4多肽包含抗体轻链的氨基酸序列。

16. 权利要求1～15中任一项所述的方法，其中，多肽多聚体为多特异性抗体。

17. 权利要求16所述的方法，其中，多特异性抗体为双特异性抗体。