[发明专利]β淀粉样蛋白的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及β淀粉样蛋白（后文中以Aβ进行说明）的高灵敏度测定方法。

背景技术

阿尔茨海默氏病是从刚进入老年期到老年期发生的以进行性的痴呆（认知症）为特征在疾病。目前，据说日本国内的患者数量达到100万人以上。可以预计在未来，伴随人口的老龄化，这一数字一定会增加。阿尔茨海默氏病的临床症状为记忆障碍、高级脑功能障碍（失语、失用、失认、结构性失用（constructional aparaxia））等。这些症状在其他痴呆症中也常见，仅通过临床症状确诊为阿尔茨海默氏病是非常困难的。

迄今为止，阿尔茨海默氏病没有根本治疗的方法，自1999年疫苗疗法在小鼠模型中成功以来，对于开发根本治疗的方法的期待不断增加（参见非专利文献1）。为了有效地利用这些根本治疗的方法，需要早期诊断阿尔茨海默氏病。

作为阿尔茨海默氏病的特征性病理组织观察结果，有脑组织中的老年斑和神经元纤维变化。前者的主要构成成分是具有β折叠结构的Aβ的凝集体，后者的主要构成成分是过度磷酸化的微管聚合蛋白（tau蛋白）。目前，关于阿尔茨海默氏病的发病，Aβ蓄积是最初发生的病理变化，这一淀粉样蛋白假说是非常有力的（参见非专利文献2）。即，已知在阿尔茨海默氏病中，在出现临床症状之前，发生Aβ在脑内蓄积等上述病理上的组织变化。因此，作为标记检测脑内的Aβ肽，成为了Aβ蓄积的疾病、特别是阿尔茨海默氏病的早期诊断方法之一。

作为阿尔茨海默氏病的体外诊断剂，广泛采用以使用对Aβ的特异性抗体的ELISA法为原理的诊断剂。根据ELISA法，基本确定了随着阿尔茨海默氏病的进行，脑脊液中由42个氨基酸构成的Aβ（Aβ42）减少（参见非专利文献3）。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Schenk D,Seubert P et al.,Nature 400:173-177,1999.

非专利文献2：Hardy JA,Selkose DF,Science 297:353-356,2002.

非专利文献3：Hansson O,Mithon L et al.,Lancet Neurol 5:228-234,2006.

发明内容

发明要解决的技术问题

但是，例如以将机体组织清洗而得到的清洗液这样的、以极低浓度（数pM的程度）含有Aβ的物质为样品，实施上述ELISA法等基于抗原抗体反应的定量测定时，由于浓度极低，所以存在不能精确测定的问题。

本发明是为了解决上述问题而完成的，其目的在于提供一种Aβ测定方法，即使在以数pM程度的极低浓度含有Aβ的样品中，也能够准确地测定Aβ浓度。

解决技术问题的手段

为了解决上述技术问题，本发明提供一种β淀粉样蛋白的测定方法，其包括：样品准备工序，在样品处理容器中加入可能含有β淀粉样蛋白的样品；浓缩工序，在上述样品处理容器中的上述样品中添加能够使β淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低上述样品中含有的溶剂的量；中和工序，中和在上述浓缩工序中获得的样品处理液中的上述增溶剂；和测定工序，基于抗原抗体反应，确定经过上述中和后的样品处理液中可能含有的β淀粉样蛋白的量。

本发明还提供一种β淀粉样蛋白的测定方法，其包括：样品处理容器准备工序，在样品处理容器中加入用于使β淀粉样蛋白附着的添加剂；样品准备工序，在上述样品处理容器中加入可能含有β淀粉样蛋白的样品；第一浓缩工序，将上述样品处理容器内的上述样品浓缩；第二浓缩工序，在通过上述第一浓缩工序浓缩后的样品中，添加能够使β淀粉样蛋白溶液化的增溶剂，通过浓缩操作，降低上述样品中含有的溶剂的量；中和工序，中和在上述第二浓缩工序中获得的样品处理液中的上述增溶剂；和测定工序，基于抗原抗体反应，确定经过上述中和后的样品处理液中可能含有的β淀粉样蛋白的量。

发明效果

根据本发明的β淀粉样蛋白的测定方法，即使在以极低浓度（例如数pM的程度）含有Aβ的样品中，也能够准确地测定Aβ浓度。

附图说明

图1是表示实施例1的各步骤的流程图。

图2是表示实施例1中测得的Aβ浓度的结果的图。

图3是表示实施例2的各步骤的流程图。

图4是表示实施例2中测得的Aβ浓度的结果的图。

图5是表示实施例3的各步骤的流程图。

图6是表示由实施例3获得的Aβ回收率的结果的图。

图7是表示实施例4的各步骤的流程图。