[发明专利]用于制备产生期望的多肽的抗体生产细胞的方法

权利要求书

1.一种将DNA构建体与抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域同源重组的方法，包括将包含DNA构建体的打靶载体导入抗体生产细胞中的步骤，所述DNA构建体包含：

(1)在所述细胞中执行功能的启动子DNA；

(2)编码期望的氨基酸序列的DNA；和

(3)抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并能够从该DNA构建体中被去除的DNA。

2.权利要求1的方法，其中(3)的DNA抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并位于两个按相同方向排列的位点特异性重组酶识别序列之间，且其中(3)的DNA包含在细胞中执行功能的启动子DNA和标记基因，且(3)的DNA能够通过位点特异性重组酶从所述DNA构建体中被去除。

3.选择细胞的方法，包括下述步骤：

(a)通过向抗体生产细胞中导入包含DNA构建体的打靶载体而允许DNA构建体与抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间同源重组，所述DNA构建体包含：

(1)在所述细胞中执行功能的启动子DNA；

(2)编码期望的氨基酸序列的DNA；和

(3)抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并能够从该DNA构建体中被去除的DNA；和

(b)选择其中在所述DNA构建体与所述抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间已发生同源重组的细胞。

4.权利要求3的方法，其中(3)的DNA抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并位于两个按相同方向排列的位点特异性重组酶识别序列之间，且其中(3)的DNA包含在细胞中执行功能的启动子DNA和标记基因，且(3)的DNA能够通过位点特异性重组酶从DNA构建体中被去除。

5.一种制备产生多肽的抗体生产细胞的方法，包括下述步骤：

(a)通过向抗体生产细胞中导入包含DNA构建体的打靶载体而允许DNA构建体与抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间同源重组，所述DNA构建体包含：

(1)在所述细胞中执行功能的启动子DNA；

(2)编码期望的氨基酸序列的DNA；和

(3)抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并能够从该DNA构建体中被去除的DNA；

(b)选择其中在DNA构建体与抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间已发生同源重组的细胞；和

(c)从步骤(b)中选择的细胞的基因组DNA中去除(3)的DNA。

6.权利要求5的方法，其中(3)的DNA抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并位于两个按相同方向排列的位点特异性重组酶识别序列之间，且其中(3)的DNA包含在细胞中执行功能的启动子DNA和标记基因，且(3)的DNA能够通过位点特异性重组酶从所述DNA构建体中被去除。

7.权利要求5的方法，其中步骤(a)至(c)定义如下：

(a)通过向抗体生产细胞中导入包含DNA构建体的打靶载体而允许DNA构建体与抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间同源重组，所述DNA构建体包含：

(1)在所述细胞中执行功能的启动子DNA；

(2)编码期望的氨基酸序列的DNA；和

(3)抑制包含所述期望的氨基酸序列的多肽的产生，并位于两个按相同方向排列的位点特异性重组酶识别序列之间的DNA，该DNA包含在所述细胞中执行功能的启动子DNA和标记基因，并且能够通过位点特异性重组酶从所述DNA构建体中被去除；

(b)选择其中在所述DNA构建体与所述抗体生产细胞的包含编码抗体可变区的DNA的区域之间已发生同源重组的细胞；和

(c)通过使位点特异性重组酶在步骤(b)中选择的细胞的基因组中的位点特异性重组酶识别序列处反应而从该细胞的基因组DNA中去除所述位于两个按相同方向排列的位点特异性重组酶识别序列之间的DNA。

8.权利要求5至7中任一项的方法，其中所产生的多肽被展示在所述细胞的表面上，和/或被分泌到所述细胞外。

9.权利要求4、6和7中任一项的方法，其中利用所述标记基因的表达作为指标来选择所述细胞。

10.权利要求3、4、6、7和9中任一项的方法，其中利用所述抗体生产细胞中内源性抗体表达的缺失作为指标来选择所述细胞。