[发明专利]特异性结合乙型肝炎病毒表面抗原的人抗体

说明书

技术领域

本发明涉及特异性结合乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抗体。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒科中的一员，它会引发急性和慢性肝炎。世界人口中大约3.5亿人，尤其在韩国和中国5-8%的人口是慢性HBV患者，而且HBV是肝病和肝癌的主因。虽然抗HBV疫苗的发展使预防乙型肝炎成为可能，但仍有很多人由于HBV感染而患上慢性肝炎。HBV感染会引起肝炎、肝硬化和肝癌，而且在慢性肝炎患者中肝癌的发生率比正常人高300倍，WHO(世界卫生组织)透露大约80%的肝癌是通过HBV感染由慢性乙型肝炎引起的。

目前可用的乙型肝炎治疗药物包括核苷酸类似物，如拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)以及其它核苷酸类似物，已知它们能够抑制HBV的DNA聚合酶。但是，施用该类药物三年后，在75%的患者中出现了抗性病毒，导致疗效降低，因此将它们与乙型肝炎抗体制剂联合应用以预防垂直传播和肝移植后的感染。

目前应用的乙型肝炎抗体制剂是采用高技术纯化和病毒灭活的方法，以具有抗-HBV抗体的人血为来源制备的，但由于具有高抗-HBV抗体的昂贵人血浆可用性低以及灭活似乎可行的人血浆来源的病毒成本高，这种方法不能满足日益增长的需要。

尽管和Milstein(1975)建立了制备单克隆抗体(mAb)的方法，源于小鼠的单克隆抗体已主要用于诊断或一些治疗。然而，由于以治疗目的施用于人体时，可能产生人抗鼠抗体(HAMA)，该鼠抗体不能施用。为了解决HAMA的问题，已经开发出了嵌合的和人源化的抗体。嵌合抗体含有鼠mAb的可变区(Fv片段)，其构成了整个抗体分子的约30%。相比之下，人源化抗体含有鼠mAb的CDRs(互补决定区)，其构成了整个抗体的约10%。虽然这类嵌合的和人源化的抗体明显降低了HAMA反应，但在治疗需要长期和持续施用的慢性病如慢性肝炎时，采用人抗体可能更好。

本发明致力于开发新的改进抗体(improved antibodies)，并发现这类抗体可通过结合HBV表面抗原而用于灭活HBV。

发明概述

因此，本发明的一个目的是提供一种特异性结合乙型肝炎病毒表面抗原的新抗体。

本发明的另一个目的是提供分别编码所述抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA，以及包括其的表达载体。

本发明的再一个目的是提供用所述表达载体转化的细胞系。

本发明的又一个目的是提供用于预防或治疗乙型肝炎的药物组合物，其包括所述抗体。

根据本发明的一个方面，本发明提供特异性结合乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的抗体，其包括：a)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区；b)具有SEQ ID NO:2、3和4所示氨基酸序列中任何一个或多个的轻链可变区；c)重链恒定区；以及d)轻链恒定区。

根据本发明的另一个方面，本发明提供编码具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区或具有SEQ ID NO:2、3和4所示氨基酸序列中任何一个或多个的轻链可变区的DNA，以及包括其的表达载体。

根据本发明的再一个方面，本发明提供用所述表达载体转化的细胞系。

根据本发明的又一个的方面，本发明提供用于预防或治疗乙型肝炎的药物组合物，其包括所述抗体。

附图说明

结合附图从本发明下面的描述中，本发明的上述和其它目的及特性将更加明显，图中分别显示如下：

图1：电泳(1%琼脂糖凝胶)分析的图像结果，显示PCR合成的分别编码本发明的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的DNA；

图2：包括本发明抗体的重链可变区和轻链可变区的噬菌体展示载体pKS4H的图谱；

图3：说明利用淘选技术(the panning technique)从抗体库筛选抗体过程的简图；

图4：从抗体库筛选出的本发明抗体的单链可变片段(scFv)的氨基酸序列；

图5：表达本发明的人抗体的重链HB48-33-重-pRC13、HB48-35-重-pRC13或HB48-59-重-pRC13的表达载体的图谱；

图6、7和8：分别为表达本发明的人抗体的轻链HB48-33-轻-pKC12、HB48-35-轻-pKC12和HB48-59-轻-pKC12的表达载体的图谱；