[发明专利]通过抑制肝细胞生长因子(HGF)的天然反义转录物而治疗HGF相关疾病

说明书

发明领域

本申请要求2009年12月23日提交的美国临时专利申请No.61/289,647的优先权，其通过引用全文并入本文。

本发明的实施方案包括调节HGF和相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。

背景

DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交对于核酸功能的许多方面是重要的，包括DNA复制、转录和翻译。杂交对于检测特定核酸或改变其表达的多种技术也是关键的。反义核苷酸，例如通过与靶RNA杂交从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制来破坏基因表达。反义DNA具有额外的特性，即DNA-RNA杂合体用作被核糖核酸酶H消化的底物，这是在大多数细胞类型中存在的活性。反义分子可被递送到细胞中，如寡脱氧核苷酸(ODN)的情形，或反义分子可从内源基因表达为RNA分子。FDA最近批准了一种反义药物VITRAVENETM(用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，反映了反义药物具有治疗效用。

概述

提供本概述以展示本发明的概述，以简要地指出本发明的性质和实质。提交本概述应理解的是，其不会用来解释或限制权利要求书的范围或含义。

在一个实施方案中，本发明提供通过利用靶向天然反义转录物任何区域的反义寡核苷酸，导致相应有义基因的上调而抑制天然反义转录物作用的方法。本文还预期，天然反义转录物的抑制可由siRNA、核酶和小分子实现，认为这些在本发明的范围中。

一个实施方案提供体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，包括将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与包括SEQ ID NO:2的核苷酸1至514、SEQ ID NO:3的核苷酸1至936或SEQ ID NO:4的核苷酸1至1075中的5至30个连续核苷酸的多核苷酸的反向互补序列具有至少50%序列同一性，从而体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达。

在实施方案中，寡核苷酸靶向HGF多核苷酸的天然反义序列，例如，SEQ ID NO:2和4所列的核苷酸，和其任何变体、等位基因、同系物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例如SEQ ID NO:5至12所列。

另一实施方案提供体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，包括将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与HGF多核苷酸的反义的反向互补序列具有至少50%序列同一性；从而体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达。

另一实施方案提供体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，包括将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与HGF反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50%序列同一性；从而体内或体外调节患者细胞或组织中HGF多核苷酸的功能和/或表达。

在实施方案中，组合物包括一种或多种结合有义和/或反义HGF多核苷酸的反义寡核苷酸。

在实施方案中，寡核苷酸包括一种或多种修饰或取代的核苷酸。

在实施方案中，寡核苷酸包括一种或多种修饰的键。

在又一实施方案中，修饰的核苷酸包括包含硫代磷酸酯、膦酸甲酯、肽核酸、2’-O-甲基、氟-或碳、亚甲基或其它锁核酸(LNA)分子的修饰的碱基。优选地，修饰的核苷酸是锁核酸分子，包括α-L-LNA。

在实施方案中，寡核苷酸被皮下、肌内、静脉内或腹膜内地施用于患者。

在实施方案中，寡核苷酸以药物组合物施用。治疗方案包括向患者施用反义化合物至少一次；然而，可修改该治疗以包括经一段时间的多个剂量。该治疗可与一种或多种其它类型的治疗联合。

在实施方案中，寡核苷酸被封装在脂质体中或被连接于载体分子(如，胆固醇、TAT肽)。

其它方面在以下描述。

附图简述

图1是实时PCR结果的图，显示利用Lipofectamine 2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸处理CHP212细胞后与对照相比HGF mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果显示，用针对HGF反义设计的一种寡核苷酸处理后48h，CHP212细胞中HGF mRNA的水平显著增加。标为CUR-0679、CUR-0680、CUR-0673至CUR-0678的条柱分别对应用SEQ ID NO:5至12处理的样品。