[发明专利]结合蛋白质和肽的特异性吸附剂及使用所述吸附剂的分离方法有效
| 申请号: | 201080057914.1 | 申请日: | 2010-12-17 |
| 公开(公告)号: | CN102811805A | 公开(公告)日: | 2012-12-05 |
| 发明(设计)人: | 克劳斯·戈特沙尔;马库斯·阿伦特;安德列亚斯·基施费尔德;克里斯蒂安·迈耶;马库斯·韦斯;马丁·维尔特;洛塔尔·齐泽 | 申请(专利权)人: | 尹思琪爱克什有限公司 |
| 主分类号: | B01J20/32 | 分类号: | B01J20/32;B01D15/38;C07K1/22 |
| 代理公司: | 北京弘权知识产权代理事务所(普通合伙) 11363 | 代理人: | 王磊;郭放 |
| 地址: | 德国*** | 国省代码: | 德国;DE |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 结合 蛋白质 特异性 吸附剂 使用 分离 方法 | ||
1.一种包括固体支承材料的吸附剂,所述吸附剂的表面包含第一残基和第二残基,其中所述第一残基包括吡啶环(-C5H4N)并且所述吡啶环的氢原子可被取代,所述第二残基包括羧基(-COOH)。
2.根据权利要求1所述的吸附剂,其中所述第一残基和/或第二残基通过长度在1和20个原子之间的共价键合的连接部分结合到所述表面。
3.根据权利要求2所述的吸附剂,其中所述连接部分是构象柔性的。
4.根据前述权利要求中任一项所述的吸附剂,其中所述第一残基为具有式I结构的吡啶-4-酰胺(异烟酰胺)残基,并且所述第二残基为具有式II结构的3-酰胺丙酸(琥珀酸单酰胺)残基,其中这两个残基均通过如式I和II中所示的其酰胺基团结合至所述固体支承材料的表面。
5.根据前述权利要求中任一项所述的吸附剂,其中所述固体支承材料的表面还包含第三残基和任选的第四残基。
6.根据权利要求5所述的吸附剂,其中所述第三残基包括胺或酰胺结构,优选伯胺结构。
7.根据前述权利要求中任一项所述的吸附剂,其中所述第一残基和第二残基的含量摩尔百分数为25mol%和75mol%之间的第一残基和在20mol%和60mol%之间的第二残基,其中所述摩尔百分数之和为100%,优选以25mol%至60mol%的第一残基和20mol%至50mol%的第二残基存在,更优选以25mol%至40mol%的第一残基和20mol%至30mol%的第二残基存在。
8.根据前述权利要求中任一项所述的吸附剂,其中所述固体支承材料包括载体,所述载体的表面上覆有具有官能团的聚合物膜,所述官能团至少部分地被所述第一残基和第二残基以及任选的所述第三残基和第四残基取代。
9.根据权利要求8所述的吸附剂,其中所述载体为聚苯乙烯磺酸酯或包括聚苯乙烯磺酸酯。
10.根据权利要求8或9所述的吸附剂,其中所述聚合物包含彼此共价交联的单个链,但是所述链没有共价接枝到所述载体的表面。
11.根据权利要求8或10中任一项所述的吸附剂,其中所述聚合物是部分衍生化的聚胺,所述聚胺优选为聚乙烯基胺,或含有聚胺的任何部分衍生化的共聚物或聚合物共混物。
12.根据权利要求11所述的吸附剂,其中所述聚合物为被具有如权利要求4中所限定的式I和II的所述第一和第二残基取代的聚乙烯基胺,其中所述式中的NH基团来自所述聚乙烯基胺。
13.一种制备根据权利要求8~12中任一项所述的吸附剂的方法,所述方法包括:
(i)提供具有官能团的聚合物;
(ii)将所述聚合物的膜吸附到载体的表面上;
(iii)利用至少一种交联剂交联被吸附的聚合物的所述官能团的限定部分;
(iv)利用包括其氢原子可被取代的吡啶环(-C5H4N)的第一残基和包括羧基(-COOH)的第二残基以及任选的其它残基来衍生化被交联的聚合物的所述官能团的其它限定部分。
14.一种从含有蛋白质或肽的混合物中分离所述蛋白质或肽或增加所述蛋白质或肽的浓度和/或纯度的方法,所述方法包括:
(i)使溶解或悬浮在第一液体中的所述混合物与根据权利要求1~12中任一项所述的吸附剂或与根据权利要求13所述制备的吸附剂接触,并持续足以使所述蛋白质或肽能够结合至所述吸附剂的时间段;
(ii)任选地使用第二液体冲洗所述吸附剂;
(iii)使含有所述结合的蛋白质或肽的所述吸附剂与第三液体接触,并持续足以使所述蛋白质或肽能够从所述吸附剂上释放的时间段;
(iv)任选地利用第四和/或第五液体洗涤和/或再生所述吸附剂。
15.根据权利要求14所述的方法,其中所述第三液体的pH接近于待分离的所述蛋白质或肽的等电点PI。
16.根据权利要求14或15所述的方法,其中所述第一液体的pH在从4.0到6.0的范围内,并且所述第三液体的pH在从6.5到8.5的范围内。
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