[发明专利]测定

说明书

本发明涉及前列腺癌的诊断性/预后性的测定，并且包括所述测定中使用的试剂盒。

癌症是一种非正常的疾病状态，其中一种或多种细胞群体的不受控制的增殖干扰正常的生物学功能。增殖性改变通常伴随细胞特性的其他改变，包括回归到缺乏组织的状态。癌细胞通常称为“转化的”。转化细胞通常表现出一些以下特性：球形形态、胎儿抗原的表达、生长因子独立、接触抑制的缺乏、贴壁不依赖、以及生长至高密度。癌细胞形成肿瘤，并被称为“原发性”或“继发性”肿瘤。原发性肿瘤导致癌细胞在原始转化细胞发育的器官中生长。继发性肿瘤由癌细胞从原发性肿瘤中逃逸，并在另一器官中建立继发性肿瘤引起。这一过程被称为转移，并且这一过程可以是侵袭性的，例如在肝细胞瘤或肺癌的情况下。前列腺癌可以相对无害或具有极端的侵袭性。一些前列腺肿瘤生长缓慢并且导致很少的临床症状。侵袭性前列腺肿瘤向淋巴结或其他器官，尤其是骨转移非常迅速。本领域技术人员已知前列腺癌的生长可以通过阻断雄性激素如睾酮而受到抑制。但是，前列腺癌最终发展并变为不依赖于雄性性激素（即它们变为不依赖雄激素型前列腺细胞）。这些细胞与侵袭性、恶性前列腺癌相关联。只有两个物种，狗和人类患前列腺癌。

先前的研究将微型染色体维持蛋白(MCM)鉴定为上皮组织的细胞周期过程中的关键调节因子(见WO99/21014和Gonzalez等人，Nature Reviews/Cancer，第5卷：第135-141页，2005年2月)。MCM被鉴定为“细胞周期状态”的有用的生物标记物，即，细胞是否能够增殖而不是静止或衰老。所有6种MCM(MCM 2-7)的表达见于细胞周期的所有时期，而在退出细胞周期进入静止期、分化或衰老期之后表达被下调。雄激素受体（AR）是一种结合雄激素睾酮和双氢睾酮的核蛋白。AR是一种转录因子，并且涉及到男性性别决定涉及的控制基因。AR的克隆和测序在WO89/09791中公开，WO89/09791描述了AR在原核和真核表达系统中的表达以及其在单克隆抗体的开发中的应用。作为用于检测前列腺癌的诊断测验的PSA的检测得到了很好的建立。PSA是由前列腺细胞分泌的一种蛋白酶。血液样本中PSA的检测被认为是受试者的前列腺癌的征兆。这具有与清楚鉴定受试者是否需要进一步研究相关的重要问题。具有高血清水平的PSA的一些受试者最终却没有发现患前列腺癌。这既引起心理上的压力又造成不必要的生理检查。

我们公开了这样的测定，该测定为在来自生物样本的分离细胞样本中前列腺癌的检测提供了可靠的测验同时去除了与男性受试者血清样本中前列腺特异性抗原的检测相关的当前问题。

根据本发明的一个方面，提供了一种用于检测生物样本中前列腺癌细胞的诊断性或预后性的方法，该方法包括以下步骤：

i)从所述生物样本中获得分离的细胞样本，并使所述分离的细胞样本与特异性结合至少一种MCM多肽的结合试剂（binding agent）接触；

ii)使分离的细胞样本与另一个特异性结合核受体多肽的结合试剂接触；任选地

iii)使分离的细胞样本与又一个特异性结合前列腺特异性抗原（PSA）的结合试剂接触；

iv)检测两种或多种结合试剂的结合；

v)确定阳性结合两个或多个结合试剂的所述分离的细胞样本中细胞的数量，其中阳性细胞的数量是生物样本中前列腺癌细胞的存在的指示剂。

在本发明的优选测定中，所述的核受体多肽是雄激素受体多肽（AR）。

在本发明的优选测定中，所述的MCM多肽选自：MCM2、MCM3、MCM4、MCM5、MCM6或MCM7多肽。

在本发明的优选测定中，所述的MCM多肽是MCM2和/或MCM7。

在本发明的优选测定中，所述的MCM多肽是MCM2。

在本发明的可选的优选测定中，所述的MCM多肽是MCM7。

在本发明的进一步优选测定中，所述的MCM多肽是MCM2和MCM7。

在本发明的优选测定中，将所述的细胞样本与特异性结合AR的结合试剂或特异性结合PSA的结合试剂接触。

在本发明的优选测定中，所述测定检测MCM多肽、AR和PSA中的至少一种。

在本发明的优选测定中，所述测定检测MCM2和/或MCM7，AR和PSA。

在本发明的优选测定中，将第（ii）步和第（iii）步颠倒。

在本发明的优选测定中，所述的结合试剂是单克隆抗体或其活性结合片段。