[发明专利]对给定靶标具有亲和力的人脂质运载蛋白2（Lcn2，hNGAL）的突变蛋白

权利要求书

1.一种用于产生源自人脂质运载蛋白2（Lcn2，hNGAL）的突变蛋白的方法，其中所述突变蛋白以可检测的亲和力结合给定非天然靶标，所述方法包括：

(a)使编码人Lcn2蛋白的核酸分子发生突变，所述突变发生在编码对应于人Lcn2线性多肽序列的序列位置96、100和106的任何序列位置中的至少一个的核苷酸三联体处，从而得到一种或多种突变蛋白核酸分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：

(b)在合适的表达系统中表达在(a)中获得的所述一种或多种突变蛋白核酸分子，以及

(c)通过选择和/或分离富集对给定靶标具有可检测的结合亲和力的一种或多种突变蛋白。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其进一步包括使所述核酸分子发生突变，所述突变至少发生在编码Lcn2的所述序列位置96、100和106中任一个的核苷酸三联体的1、2或全部3个处。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其进一步包括使所述核酸分子发生突变，所述突变至少发生在编码hLcn2线性多肽序列的序列位置36、40、41、49、52、68、70、72、73、77、79、81、103、125、127、132和134中任一个的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或全部17个核苷酸三联体处。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其通过仅以核苷酸三联体组实现的替换，使至少在编码hLcn2线性多肽序列的序列位置36、40、41、49、52、68、70、72、73、77、79、81、96、100、103、106、125、127、132和134中任一个的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个核苷酸三联体处发生随机突变。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在突变期间，编码半胱氨酸的核苷酸三联体不用于替换。

7.一种通过根据权利要求1至6中任一项所述的方法可获得的源自Lcn2蛋白的突变蛋白，所述突变蛋白在对应于Lcn2线性多肽序列的序列位置96、100和106的序列位置中的任一个处包含至少一个突变的氨基酸残基，并且其中所述突变蛋白以可检测的亲和力结合给定非天然靶标。

8.根据权利要求7所述的突变蛋白，其中所述突变蛋白在Lcn2线性多肽序列的序列位置96、100和106处包含2或3个突变的氨基酸残基。

9.根据权利要求7或权利要求8所述的突变蛋白，其进一步在对应于Lcn2线性多肽序列的序列位置36、40、41、49、52、68、70、72、73、77、79、81、103、125、127、132和134的序列位置中的任一个处包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个突变的氨基酸残基。

10.根据权利要求8或9中任一项所述的突变蛋白，其在Lcn2线性多肽序列的序列位置36、40、41、49、52、68、70、72、73、77、79、81、96、100、103、106、125、127、132和134中的任一个处包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17个突变的氨基酸残基。

11.根据权利要求10所述的突变蛋白，其在Lcn2线性多肽序列的序列位置36、40、41、49、52、68、70、72、73、77、79、81、96、100、103、106、125、127、132和134中的任一个处包含18、19或20个突变的氨基酸残基。

12.根据权利要求7至11中任一项所述的突变蛋白，其中所述非天然靶标选自肽、蛋白、蛋白的片段或结构域、和小有机分子。

13.根据权利要求12所述的突变蛋白，其中所述小有机分子为显示免疫半抗原的特征的化合物。

14.根据权利要求12所述的突变蛋白，其中所述肽具有2-45个氨基酸的长度。

15.根据权利要求14所述的突变蛋白，其中所述肽为β淀粉样肽。

16.根据权利要求15所述的突变蛋白，其中所述β淀粉样肽为Aβ40肽或Aβ42肽。