[发明专利]用于抗血管生成治疗的双特异性结合分子

权利要求书

1.一种双特异性结合分子，其包含Dll4结合组分及VEGF结合组分。

2.权利要求1的双特异性结合分子，其中该Dll4结合组分和该VEGF结合组分分别包含至少一个Dll4结合免疫球蛋白单一可变域和至少一个VEGF结合免疫球蛋白单一可变域。

3.权利要求2的双特异性结合分子，其中所述免疫球蛋白单一可变域为VHH。

4.权利要求2或3的双特异性结合分子，其中该VEGF结合组分位于N端。

5.权利要求2至4中任一项的双特异性结合分子，其中该Dll4结合组分和该VEGF结合组分分别包含至少一个VEGF结合免疫球蛋白单一可变域和至少一个Dll4结合免疫球蛋白单一可变域，其中每一个所述免疫球蛋白单一可变域具有四个框架区和三个分别为CDR1、CDR2和CDR3的互补决定区，

其中

a)所述至少一个Dll4结合免疫球蛋白单一可变域的CDR3具有选自以下的氨基酸序列：

i.如SEQ ID NO:1中所示的Arg Ala Pro Asp Thr Arg Leu Xaa Pro TyrXaa Tyr Asp Xaa，其中

位置8的Xaa为Arg、Ala或Glu；

位置11的Xaa为Leu或Glu；及

位置14的Xaa为Tyr或His；及

ii.如SEQ ID NO:2中所示的Asp Arg Tyr Ile Trp Ala Arg Gln Gly GluTyr Trp Gly Ala Tyr Xaa Asp Tyr，其中Xaa为Gln、Ala或Tyr；且

其中

b)所述至少一个VEGF结合免疫球蛋白单一可变域的CDR3具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列Ser Arg Ala Tyr Gly Ser Ser Arg Leu Arg Leu AlaAsp Thr Tyr Xaa Tyr，其中Xaa为Asp或Glu，

其中该VEGF结合免疫球蛋白单一可变域能够以≥60％的抑制率阻断人重组VEGF165与人重组VEGFR-2的相互作用。

6.权利要求5的双特异性结合分子，其中该免疫球蛋白单一可变域为VHH，其由亲本免疫球蛋白单一可变域VHH任选在亲和力成熟后进行序列最优化而获得。

7.权利要求6的双特异性结合分子，其中所述结合Dll4的VHH从具有氨基酸序列选自SEQ ID NO:4-20及表5中所示序列的亲本VHH获得。

8.权利要求7的双特异性结合分子，其中该亲本VHH具有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列。

9.权利要求8的双特异性结合分子，其中所述结合Dll4的VHH由具有SEQ ID NO:10中所示序列的VHH衍生的亲和力成熟的VHH进行序列最优化而获得，其中该亲和力成熟的VHH选自具有SEQ ID NO:21-27及表16中所示的氨基酸序列的VHH。

10.权利要求9的双特异性结合分子，其中该亲和力成熟的VHH具有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列，且其中该序列最优化的VHH具有选自SEQ ID NO:34及35以及表23中所示序列的氨基酸序列。

11.权利要求7的双特异性结合分子，其中该亲本VHH具有SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列。

12.权利要求11的双特异性结合分子，其中所述结合Dll4的VHH已由具有SEQ ID NO:12中所示序列的VHH衍生的亲和力成熟的VHH进行序列最优化而获得，其中该亲和力成熟的VHH选自具有SEQ ID NO:28-33及表17中所示的氨基酸序列的VHH。

13.权利要求12的双特异性结合分子，其中该亲和力成熟的VHH具有SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列，且其中该序列最优化的VHH具有选自SEQ ID NO:40及41中所示序列的氨基酸序列。

14.权利要求6的双特异性结合分子，其中所述结合VEGF的VHH源自具有序列选自SEQ ID NO:42-44及表32中所示序列的VHH。