[发明专利]通过对随机序列聚合物的组合物基于血清蛋白的检测，改进含随机序列聚合物的组合物的设计、生物利用度和效能的方法

说明书

相关申请

本申请要求2009年11月17日递交的美国临时申请No.61/281,470和2010年9月27日递交的美国临时申请No.61/386,909的优先权益。

背景技术

现有技术中已有检测简单多肽的方法。然而，由于受检多肽的异质性，检测一组多肽混合物而非具有明确氨基酸序列的一种多肽的有效血浆浓度方法很复杂。例如，含随机序列聚合物(RSP)的组合物包括随机掺入多肽链的氨基酸的复杂混合物。RSP组合物由氨基酸的特性和比例而不是特定序列决定。鉴于多肽的多样性，需要对多种制造方法制备的这些RSP组合物的均一性和组成进行评估的改进方法。确定RSP组合物在体内的状态具有重要的免疫学意义，因为取决于给药途径和/或给药频率及血清蛋白与RSP组合物的结合，这种肽混合物可能激发初级炎症反应(TH1型)或初级调控反应(TH2型)，导致其在受试对象中的药代动力学和药效学改变。更加严谨的设计和坚持给予RSP组合物可能提高治疗效果或者减少潜在的不良炎症应答反应。

因此，为了治疗目的，需要定量分析RSP组合物的方法，例如有助于评估这种肽混合物在体内的状况和确定合适的剂量及给药方式。

发明概述

本申请提供检测和评价RSP组合物的改进的方法。本发明提供检测和定量分析RSP组合物的方法。本发明提供基于肽亚组与特定捕获多肽相互作用的测定，和富集RSP组合物中多肽亚组亚组的方法。本发明进一步提供对需要接受治疗的患者给予RSP组合物的方法，其中可根据上述检测和定量方法来确定或评估给药方案和剂量。

本申请还提供检测RSP组合物的方法，包括以下步骤：(a)将所述RSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白质生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(c)所述结合蛋白产物；(e)将(c)所述蛋白质附着于定量检测所述RSP组合物用的工具上；和(f)测定所述RSP组合物与(e)所述蛋白每一种的结合。

本说明书也提供一种改进RSP组合物设计的方法，包括以下步骤：(a)将所述RSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(c)所述的结合蛋白产物；(e)使(c)所述蛋白质附着于定量检测RSP组合物用的工具上；(f)测定所述RSP组合物与(e)所述蛋白质结合的每一种肽；(g)调整所述RSP组合物的设计以增加或减少与(e)所述一种或多种蛋白质的结合；(h)重复步骤(f)；(i)任选地重复步骤(f-h)，其中调整所述RSP组合物的设计可导致一种或多种效果：提高生物利用度、减少毒性和提高效能。

此外，本申请提供一种检测RSP组合物中肽种类的方法，包括以下步骤：(a)将所述RSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(c)所述结合蛋白制品；(e)使(c)所述蛋白质附着于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物与所述RSP组合物接触；(g)测定所述RSP组合物中每种肽与(f)所述固相支持物的结合。

另外，本申请提供一种改进RSP组合物中肽种类设计的方法，包括以下步骤：(a)使所述RSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述蛋白质；(d)获得基本纯的(c)所述结合蛋白制品；(e)使(c)所述蛋白质附着于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物与所述RSP组合物接触；(g)测定所述RSP组合物中与(f)所述固相支持物结合的每一种肽；(h)调整所述RSP组合物的设计以增加或减少与(f)所述一种或多种蛋白质的结合；(i)重复步骤(g)；(j)任选地重复步骤(g-j)，其中调整所述RSP组合物肽种类的设计可导致一种或多种效果：提高生物利用度、减少毒性，和提高效能。

通过应用本申请所述方法，研究者不仅可以更可靠地检测RSP组合物中的低含量组分，而且可以特异性地检测RSP组合物中与生物活性如毒性或效力有关或对其有贡献的肽种类。