[发明专利]用于在视黄酸存在下制备T细胞群的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于制备包含记忆T-样细胞的细胞群的方法，其可用于医学领域，尤其是免疫治疗。本发明还涉及一种用于制备包含被所需基因高效转移到其中的T细胞的细胞群的方法，其可用于医学领域。

本申请要求2009年8月25日申请的日本专利申请号2009-194444和2009年12月18日申请的日本专利申请号2009-287258的优先权，两篇申请都以其整体结合到本文中。

背景技术

保护活体免受外源物质主要通过免疫应答，免疫系统由各种细胞和它们产生的可溶性因子组成。在各种细胞中，白细胞，尤其是淋巴细胞起主要作用。淋巴细胞分为称为B淋巴细胞(在下文中，在某些情况下称为B细胞)和T淋巴细胞(在下文中，在某些情况下称为T细胞)的两种主要类型，且两种细胞都特异性识别抗原并作用于抗原以保卫活体。

在外周中，具有CD(分化群)4标记物的CD4阳性T细胞和具有CD8标记物的CD8阳性T细胞占T细胞的大多数。大多数CD4阳性T细胞(称为辅助T(在下文中称为Th)细胞)参与辅助抗体产生和诱导各种免疫应答，并视通过抗原刺激从其产生的不同种类的细胞因子，分化为Th1型、Th2型等。大多数CD8阳性T细胞(称为细胞毒性T细胞[Tc：细胞毒性T淋巴细胞，亦称为杀伤性T细胞，在下文中，在某些情况下称为CTL])通过抗原刺激表现细胞毒活性，并分化为产生I型细胞因子(例如干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2))的Tc1型或产生II型细胞因子(例如IL-4和IL-10)的Tc2型。

一些CTL可识别其中主要组织相容性复合体(在下文中，缩写为MHC)中编码的MHC I类分子(在人的情况中，称为人白细胞抗原I类分子，在下文中缩写为HLA I类分子)通过特定T细胞受体(在下文中缩写为TCR)与抗原结合到一起的复合体，并破坏在细胞表面上呈递复合体的细胞。

作为仅次于外科手术、化学疗法和放射疗法的第四种癌症疗法，免疫治疗最近已引起关注。因为免疫治疗利用人本来拥有的免疫能力，所以据说对患者的身体劳损相比于其他治疗要轻。已知的免疫治疗包括：包括细胞(例如淋巴因子激活的细胞、NKT细胞或γδT细胞)转移的治疗，所述细胞通过使用各种方法扩大培养从离体诱导CTL或者外周血淋巴细胞获得；树突细胞转移治疗和肽疫苗治疗，预期通过所述治疗体内诱导抗原特异性CTL；Th1细胞治疗；和免疫基因治疗，其包括将可预期各种效果的基因离体转移到这些细胞中，并将细胞转移到体内。

淋巴因子激活的细胞(LAK细胞)是具有细胞毒活性的功能细胞群，其通过向包含淋巴细胞的外周血(外周血白细胞)、脐带血、组织液等中加入IL-2，随后体外培养数天获得。通过向培养物中加入抗-CD3抗体，进一步加快LAK细胞的增殖。如此获得的LAK细胞对多种癌细胞和其他靶标非特异性地具有毒活性。

对于包括转移LAK细胞的免疫治疗，存在的问题是例如离体诱导的抗原特异性CTL的扩大培养期间如何维持细胞毒活性，和可如何有效地离体扩大培养淋巴细胞。为了解决这样的问题，已研究了使用纤连蛋白或其片段的作用(例如，专利文献1-3)。

通过分析其细胞表面抗原，将记忆T细胞与幼稚T细胞区分开。亦可通过其功能的不同将记忆T细胞与幼稚T细胞区分开。换言之，相比于幼稚T细胞，记忆T细胞可通过较弱的抗原刺激更加迅速地分化为效应细胞(非专利文献1)。另外，记忆T细胞与幼稚T细胞功能上不同，因为从记忆T细胞分化而来的一种效应细胞可同时产生多种细胞因子。然而，记忆T细胞分化的分子机制是未知的。

基于归巢能力或效应子功能的不同，记忆T细胞包括称为中枢记忆T细胞和效应记忆T细胞的两种不同细胞群(非专利文献2)。

近年来，已报道，在免疫治疗中可通过向活体给予与已终末分化的效应T细胞相比处于较未分化状态的幼稚T细胞或中枢记忆T细胞预期高得多的治疗效果(例如非专利文献3和4)。

就免疫基因治疗而言，可预期赋予对靶抗原特异的细胞毒活性，例如通过将能够识别靶抗原的TCR基因转移到T细胞(包括CTL)中。基于该预期，已尝试了使用靶向各种抗原(例如MART1、gp100和mHAG HA-2抗原)的TCR基因的基因治疗。另外，已尝试了使用编码作为被转移到T细胞中的受体的嵌合受体的基因的基因治疗，该嵌合受体通过组合人源TCR和源自非人生物的TCR，以及识别靶抗原的抗体的抗原识别位点、与TCR缔合形成抗原识别复合物的一类分子(例如CD3)、T细胞表面抗原(例如CD8、CD28)及其一部分而获得。