[发明专利]连续回收收获袋

说明书

一种能够保存液体的无孔容器，所述无孔容器包括外壁表面和内壁表面，所述内壁表面限定了保存液体的内室；滤器，其具有周边、第一表面和第二表面，并且环绕其整个周边固定连接至所述无孔容器的内壁表面的部分，因而在所述无孔容器内形成整合的内袋；以及配件，其在与所述整合的内袋的第一表面相邻的外壁表面的部分连接至所述无孔容器的外壁，所述配件形成通孔，通孔设置用于允许液体从内室流经所述整合的内袋，流经滤器，并从所述通孔流出。

相关申请

本申请根据35 USC 119(e)要求于2009年8月26日提交的美国临时申请61/237,286和于2009年9月8日提交的美国临时申请61/240,323的优先权，将两者以其全文在此引入作为参考。

发明领域

本公开涉及收获细胞的装置和方法，所述细胞在例如二维一次性袋(twodimensional disposable bag)或三维一次性台式生物反应器袋(three dimensionaldisposable bench top bioreactor bag)或更大的一次性生物反应器中的微载体上生长。

背景技术

细胞培养是制备许多生物产品必不可少的步骤，所述生物产品例如核酸、用于疫苗中的病毒、抗体和蛋白(例如干扰素)。依赖贴壁细胞(例如一些动物细胞)需要附着于表面以生长和分裂。

对于大规模细胞培养，微载体提供了依赖贴壁细胞生长所需的较大表面积。VanWezel于1967公开了微载体、小珠子(bead)或直径约0.2mm的颗粒在所述细胞生长中的用途。在生物反应器袋内将所述微载体混悬于培养基中。将细胞(接种物)加入混悬有所述微载体的液体培养基中。在该细胞培养方法中，有时用温和的搅动来帮助所述微载体珠子保持混悬。

不依赖贴壁细胞(又名“悬浮细胞”)不需要生长于其上的固体载体，并且能够生长于细胞混悬液中。

连续或灌注模式：在连续或灌注模式中，新鲜的富营养培养基连续地流经附着细胞群的微珠混悬液，或流经细胞混悬培养液。在整个培养期中都可收获产物。除去了毒性代谢产物，且有时除去了死细胞。在混悬培养液中，由于细胞的尺寸较小，因此除去营养枯竭的培养基同时在生物反应器中保留细胞的方法存在持续的问题。现有的过滤方法和系统存在一些典型的缺点，包括滤器的堵塞和所述生物反应器内死细胞的蓄积。这些问题影响了回收的产物量，并使所述灌注生物反应器系统难以放大至工业规模。

分批模式：在分批模式中，在开始时加入所有营养素，且直到一批结束时才取出产物。废物在进程中蓄积并且营养素被用尽，使所述分批方法在很多应用中并不有效。

补料分批模式：补料分批模式与分批模式的相似之处在于产物只在进程结束时才被取出，但不同之处在于在该方法过程中营养素以多次间隔加入。

在上述各个模式中，细胞群可将感兴趣的产物分泌或释放入培养基中。通过从所述生物反应器袋取出至少一部分所述培养基而收获产物，同时在所述生物反应器袋中留下来自细胞混悬液或附着细胞群的微载体珠子的细胞。如上文所述，在连续或灌注模式中，在整个培养期中收获产物。在分批和补料分批模式中，产物只在进程结束时才取出。

在培养细胞的这些模式的每一个中，在收获期中从培养基分离微载体珠子或细胞的最常规方法是使所述珠子或细胞沉降然后倾倒该液体，或在外部过滤该混合物。这些方法都不有效，并且都需要大量时间以完成分离。

外部滤器可用于法向流过滤(Normal Flow Filtration，NFF)中，其中液体流接近法向，即垂直于滤器表面。除了NFF是一种相对较慢的方法之外，在NFF中未通过滤器的颗粒会蓄积并且容易堵塞滤器。