[发明专利]细胞培养/处理产品及其制备方法和应用

说明书

发明领域

本发明在细胞生物学领域范围内。更贴切地，其涉及细胞培养和/或处理产品以及制备所述细胞培养/处理产品的方法，该方法将苯基葡聚糖用于所述产品的涂布。本发明还涉及所述细胞培养/处理产品的应用。

发明背景

对于细胞培养、细胞处理和细胞贮藏而言，对有效地抑制细胞附着或粘附的材料有高需求。当扩繁、处理、转移或贮藏细胞时，非特异性依附或附着于组织培养平板/瓶、管或袋上的塑料可为主要问题。例如，当将贴壁细胞于微载体上培养时，一些细胞可在接种期间附着于区室的底部，或者一旦所述微载体与细胞汇合，其可依附于细胞培养袋。此外，许多未经处理的旨在用于悬浮培养的组织培养塑料，允许贴壁细胞(例如间充质干细胞)的附着，如果需要避免附着，这是一个问题。

已知聚乙二醇(PEG)和葡聚糖具有抗细胞粘附特性。例如：

1)Monchaux，E.，和Vermette，P.(2008)。Cell adhesion resistance mechanisms using arrays of dextran-derivative layers(利用葡聚糖衍生层阵列的细胞粘附抵抗机制).J Biomed Mater Res A 85，1052-1063。该工作描述了应用羧甲基葡聚糖以涂布表面。如下制备羧甲基葡聚糖(CMD)：通过将溴乙酸和葡聚糖反应16h，然后渗析(3x 24h)并冷冻干燥。在过夜过程中将硼硅玻璃进行酸洗，然后在等离子聚合反应器中用正庚胺进行表面改性。将CMD溶液用EDC和NHS活化，并分配于所述经表面改性的表面之上，然后进行过夜偶联反应和洗涤24h。实施整个过程需要超过一周。

2)Massia，S.P.，Stark，J.，和Letbetter，D.S.(2000)。Surface-immobilized dextran limits cell adhesion and spreading(表面固定化葡聚糖限制细胞粘附和铺展).Biomaterials 21，2253-2261。该论文描述了应用固定化葡聚糖以防止细胞粘附和铺展。在24h反应中用高碘酸钠氧化葡聚糖，然后进行渗析和冷冻干燥。在6步的程序中清洗PET盖玻片和玻璃显微镜载玻片。然后用乙二胺将PET盖玻片表面改性，以及用3-氨丙基三乙氧基硅烷处理玻璃显微镜载玻片。胺改性表面最后在氧化的葡聚糖溶液中浸泡16h。在倾析及在硼氢化钠溶液中孵育2h后，将葡聚糖涂布的表面漂洗和干燥。实施整个过程需要约1周。

因此，现有技术的方法非常复杂且耗时。

发明简述

本发明提供了一种以低成本获得低粘附的细胞培养和处理产品的简单且方便的方法。

本发明人已发现苯基葡聚糖可用作表面涂层以减少细胞附着于疏水表面(例如细胞培养塑料)。此外，本发明人已发现涂布方法既快速又简单，并且可用极低浓度的苯基葡聚糖获得所需功能。可将涂布产品用于任何细胞类型或组织的培养或处理而不影响它们的固有特性。

当在微载体或支架上培育细胞时，本发明也对避免非特异性附着于细胞培养区室的底部有用。

在第一方面，本发明涉及培养和/或处理细胞的装置，所述装置具有至少一个暴露于所述细胞的表面，其中将所述至少一个表面用苯基葡聚糖涂布。所述装置可包括细胞培养和/或处理产品，所述产品可为适合于细胞培养、细胞处理、细胞转移或细胞贮藏的任何容器或器皿。优选这样的器皿或容器的内表面为疏水表面。或者，使用非疏水器皿或容器，在加入苯基葡聚糖之前向所述器皿或容器提供疏水表面。

细胞培养和/或处理产品可例如为培养平板、培养瓶、微量滴定板、管、烧杯或袋，其中将其至少一个内表面用苯基葡聚糖涂布。

在第二方面，本发明涉及制备细胞培养/处理产品的方法，其包括在没有预处理疏水表面的情况下，将浓度为0.1-5mg/ml的苯基葡聚糖溶液涂布于所述表面上。

在第三方面，本发明涉及防止贴壁细胞对细胞培养/处理产品表面的细胞粘附或附着的方法，其包括在如上述的细胞培养和/或处理产品中培养细胞。

优选地，所述细胞为贴壁干细胞、原代细胞或细胞系、组织/器官块或悬浮细胞，其保持为单细胞、三维结构(例如球体)或附着于二级结构(例如载体、支架或盘)。

在又一个实施方案中，本发明涉及一种方法，其包括加入微载体用于细胞在其上生长。所述细胞将在所述微载体上生长，且不附着于细胞培养产品的表面。

在第三方面，本发明涉及苯基葡聚糖用于涂布细胞培养/处理表面以防止细胞粘附的用途。优选地，苯基葡聚糖以0.1-5mg/ml的浓度涂布。