[发明专利]检测中所用的颗粒中的信号生成的稳定化

说明书

背景

本发明涉及用在测定样品中的被分析物的方法、组合物和试剂盒中的能够生成信号的颗粒。本发明还涉及此类颗粒生成的信号的稳定化。

临床诊断领域近年来在容易和精确测定的相关材料的种类以及测定方法方面都获得广泛发展。大多数方法涉及与样品中一种或多种被分析物的存在和/或量相关的信号的生成。发光化合物，如荧光化合物和化学发光化合物，由于它们的发光能力而广泛用于检测领域。颗粒，如胶乳颗粒、脂质体等已用于检测。染色的胶乳颗粒之前不仅用于免疫测定，还用于其它多种多样的用途，如光动力学疗法和作为颜料。吸收性染料和产生荧光或化学发光性质的染料都已被加入颗粒中。在一种特定方法中，包含一种或多种金属螯合物，例如，镧系元素螯合物的颗粒用于生成信号。

在美国专利Nos. 5,340,716和6,251,581中描述了诱导发光免疫测定，它们的公开内容经此引用并入本文。在一种方法中，该检测使用包含光敏剂的颗粒和包含化学发光化合物的标记颗粒。与被分析物的存在相关地，标记颗粒共轭到能结合到被分析物上的特异性结合对（sbp）成员上以形成络合物，或共轭到第二sbp成员上以形成络合物。如果存在被分析物，光敏剂和化学发光化合物靠近。光敏剂生成单态氧并在这两种标记靠近时活化化学发光化合物。活化的化学发光化合物随后产生光。产生的光的量与形成的络合物的量相关，后者又与存在的被分析物的量相关。在一种特定方法中，该化学发光颗粒包含一种或多种金属螯合物，例如，镧系元素螯合物。

在该诱导发光法的一种变体中，使用包含（a）在照射时能生成单态氧的光敏剂和（b）能被单态氧活化的化学发光化合物的微粒载体。该方法能够生成延迟发光，其可在照射载体时实现。该方法可用于测定被疑含有被分析物的介质中的被分析物。一种方法包括对被疑含有被分析物的介质施以与被分析物的存在相关地形成sbp成员的络合物的条件并测定通过使用具有化学发光和光敏剂性质的微粒组合物作为标记是否已形成sbp成员络合物。在光敏剂性质活化时，生成单态氧并活化化学发光性质。在美国专利No. 5,709,994中描述了这样的组合物和方法，其相关公开内容经此引用并入本文。

仍然需要使用于检测的标记试剂中的信号生成最大化。对被分析物浓度变化的信号响应是检测发展中的重要考虑因素。这种标记试剂应提供最大化性能，包括灵敏性。

概述

本发明的一个实施方案是增强化学发光试剂的稳定性的方法，该试剂包含具有与其缔合的(having associated therewith)包含金属和一种或多种螯合剂的络合物的化学发光组合物的固体载体。该化学发光试剂存在于介质中。该方法包括以足以增强该固体载体的化学发光试剂的稳定性的量在该介质中加入一种或多种稳定剂，其可以是螯合剂和/或金属螯合物，例如该络合物本身。

本发明的另一实施方案是用于测定被疑含有被分析物的样品中被分析物的存在和/或量的化学发光试剂。该化学发光试剂存在于介质中。该化学发光试剂包含具有与其缔合的特异性结合对（specific binding pair）的成员并具有并入其中的金属和一种或多种螯合剂的络合物的固体载体。该介质进一步包含一种或多种稳定剂，其可以是螯合剂和/或金属螯合物，例如，该络合物本身，其中该介质中所述一种或多种稳定剂的量足以增强该固体载体的化学发光试剂的稳定性。

本发明的另一实施方案是测定被疑含有被分析物的样品中被分析物的存在和/或量的方法。在介质中提供组合。该组合包含（i）该样品，（ii）上述化学发光试剂，和（iii）与颗粒缔合并能生成单态氧的光敏剂。被分析物的特异性结合对成员与至少一种固体载体或颗粒缔合。对该组合施加使被分析物结合到被分析物的特异性结合对成员上的条件。用光照射光敏剂并测定该化学发光组合物产生的发光量。发光量与该样品中被分析物的量相关。

具体实施方案详述

一般论述

本方法和试剂的实施方案涉及固体载体，例如颗粒。该载体包含含金属螯合物的化学发光组合物。本发明人观察到，在用于测定被分析物的检测中使用这样的载体，例如颗粒时，与该颗粒缔合的化学发光组合物的信号输出的稳定性与包含其它化学发光组合物的颗粒相比不可接受地降低。根据本发明的实施方案，通过在包含该颗粒的介质中包括足量的一种或多种稳定剂，增强来自这些颗粒的信号输出的稳定性，所述稳定剂可以是螯合剂和/或金属螯合物，例如与该颗粒缔合的金属螯合物。