[发明专利]重金属整治系统

权利要求书

1.一种用于在细菌中表达重金属螯合基因的载体，所述载体包括以下功能连接的元件：

载体骨架，

转录组成型启动子序列，其源自质体16S rrn基因，

翻译增强子元件序列，其源自噬菌体T7基因10，

螯合剂的编码序列，

其中所述载体是在所述细菌中。

2.如权利要求1所述的载体，还包括3’UTR不依赖ρ因子的转录终止子序列。

3.如权利要求2所述的载体，其中所述3’UTR终止子是质体rps16基因转录终止子或大肠杆菌rrnB基因转录终止子。

4.如权利要求3所述的载体，其中所述3’UTR转录终止子是质体rps16基因转录终止子。

5.如权利要求1所述的载体，其中所述螯合剂由mt、ppk或β-半乳糖苷酶(lacZ)基因编码。

6.如权利要求5所述的载体，其中所述螯合剂是由ppk合成的多磷酸盐，且所述细菌抵抗高达约100μM汞、250μM镉、1000μM锌或3,000μM铅。

7.如权利要求5所述的载体，其中所述mt是哺乳动物金属硫蛋白。

8.如权利要求7所述的载体，其中所述螯合剂由小鼠mt1基因序列编码，且所述细菌抵抗高达约160μM汞、至少约250μM镉、至少约1,000μM锌或至少约3,000μM铅。

9.如权利要求5所述的载体，其中所述螯合剂由β-半乳糖苷酶基因序列编码，且所述细菌抵抗高达约140μM汞、至少约250μM镉、至少约1,000μM锌或至少约3,000μM铅。

10.如权利要求1所述的载体，其中所述载体骨架是质粒骨架。

11.一种细菌，该细菌包括转基因螯合剂，其中所述细菌抵抗在至少约25μM和约100μM之间的Hg。

12.如权利要求11所述的细菌，其中所述螯合剂基因从强启动子转录并且侧翼为选定的5’UTR和任选的选定的3’UTR，例如至少在4,000和8,500拷贝之间的稳定的转录物每ng总mRNA对应于所述螯合剂基因。

13.如权利要求12所述的细菌，其中至少在6,000和7,500拷贝之间的稳定的转录物每ng总mRNA对应于所述螯合剂基因。

14.如权利要求12所述的细菌，其中所述螯合剂基因从源自质体16Srrn基因的转录组成型启动子序列转录。

15.如权利要求12所述的细菌，其中所述螯合剂基因侧翼为源自噬菌体T7基因10的5’UTR翻译增强子元件序列和质体rps16基因3’UTR不依赖ρ因子的转录终止子序列。

16.如权利要求11所述的细菌，其中所述螯合剂基因从源自质体16Srrn基因的转录组成型启动子序列转录，并且侧翼为源自噬菌体T7基因10的5’UTR转录增强子元件序列和质体rps16基因3’UTR不依赖ρ因子的转录终止子序列。

17.如权利要求11所述的细菌，其中所述螯合剂编码序列对应于小鼠mt1基因，且其中所述细菌抵抗高达约160μM汞、至少约250μM镉、至少约1,000μM锌或至少约3,000μM铅。

18.如权利要求11所述的细菌，其中所述螯合剂编码序列对应于β-gal基因，且其中所述细菌抵抗高达约140μM汞、至少约250μM镉、至少约1,000μM锌或至少约3,000μM铅。

19.如权利要求11所述的细菌，其中所述螯合剂编码序列对应于ppk基因，且其中所述细菌抵抗高达约100μM汞、高达约250μM镉、至少约1,000μM锌或至少约3,000μM铅。

20.如权利要求11所述的细菌，所述细菌当处于包含汞的液体环境中时，累积汞且在着色上变深。

21.如权利要求11所述的细菌，所述细菌当处于包含汞、镉、锌或铅的液体环境中时，累积汞、镉、锌或铅且在着色上变深。

22.如权利要求11所述的细菌，所述细菌选自大肠杆菌、假单胞菌、蓝细菌和芽孢杆菌。