[发明专利]细胞释放的方法和试剂盒

说明书

领域

本发明涉及细胞释放的方法。更详细地讲，本发明涉及从基于聚合物的细胞培养载体释放细胞的方法。

背景

黏附细胞通常在玻璃表面或聚合物基底上生长。常将用于细胞培养的表面预处理以增强细胞黏附和繁殖。在生物医学和生物应用中长期需要允许按需细胞脱离或细胞释放的用于黏附细胞的基质。

培养的细胞可通过多种方法从细胞培养载体中脱离或释放。常用的细胞释放方法包括机械方法(诸如，刮削)、用蛋白水解酶(诸如，胰蛋白酶)处理、使用钙螯合剂(诸如，EDTA)或这类方法的组合。然而，这些常规细胞释放方法中的许多可对培养的细胞产生不利影响，且可改变其固有的结构和功能。例如，用胰蛋白酶处理细胞(即，胰酶消化)是一种生硬的方法，且由于其对细胞表型的潜在影响而使得对诸如干细胞的脆弱细胞不合需要。此外，胰蛋白酶通常来源于动物，且可含有杂质，如同时分级分离的蛋白质或生物制剂(诸如，病毒或支原体)。动物源杂质可限制释放的细胞用于诸如细胞疗法的严苛应用的用途。释放细胞的机械方法为劳动密集型的且对于工业规模细胞培养应用来说常常不实用。

其他非酶促法包括使用超声波或冲击波的物理方法，其产生促进细胞脱离的气泡。自包含热响应型聚合物如聚-N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAm)的细胞培养载体培养的细胞可通过冷却细胞培养载体到在约4-20℃范围内的温度来释放。

有效细胞释放对于工业规模细胞培养方法中的高产率特别重要。因此，存在对研发在不影响细胞形态和细胞活力的情况下快速有效细胞脱离的更好细胞释放技术的新兴需求。

发明简述

本发明通常包括用于从细胞培养载体中释放细胞的方法和试剂盒。

从细胞培养载体中释放细胞的方法的实例包括将培养细胞提供在细胞培养载体上且通过加入释放溶液从所述细胞培养载体释放所述培养细胞。所述释放溶液包含二甲亚砜(DMSO)。所述细胞培养载体包括在基底上的多层基于聚电解质的涂层。

用于培养细胞的试剂盒的实例通常包括细胞培养载体和用于细胞释放的释放溶液。所述释放溶液包含DMSO。所述细胞培养载体包括基底和在所述基底上的多层基于聚电解质的涂层。

用于释放细胞的方法的另一实例包括以下步骤：在细胞培养载体(包括在基底上的多层基于聚电解质的涂层)上提供培养的人间充质干细胞，和在室温下通过用释放溶液培育细胞而从所述细胞培养载体释放培养细胞。所述释放溶液包含在PBS中的约0.01％DMSO。

附图

在参考附图阅读以下详述时将更加透彻地理解本发明的这些和其他特征、方面和优势，在附图中相同的符号表示相同元件，其中：

图1A为在加入包含DMSO的释放溶液之后未涂布载玻片的图像。图1B为在使用包含DMSO的释放溶液释放细胞之后具有多层基于聚电解质的涂层的载玻片的图像。

图2代表WST-1细胞测定的图示，说明当与释放的细胞混合并在450nm下测量时WST-1试剂的光学密度的变化。在450nm下的光学密度与测定系统中存在的细胞数目相关。细胞使用包含在PBS中的DMSO的释放溶液而从未涂布或多层聚电解质涂布的载玻片释放。

发明详述

为了更清楚且简明地描述本发明的发明主题，对于各专业术语提供以下定义，其用于以下描述和随附权利要求书中。在整个说明书，专业术语的范例应该视为非限制性实例。

本文所提到的“细胞培养载体”为用于黏附并培养细胞的载体。所述细胞培养载体可包括基底。所述基底可用用于细胞黏附和繁殖的合适涂料涂布或层化。合适的涂料可包括但不限于聚电解质。

本文所提到的“基底”为对涂层提供载体的基础或支持物。涂布的基底可用作细胞培养载体。

本文所提到的“释放溶液”为帮助细胞从细胞培养载体中释放或脱离的溶液。所述释放溶液包含一种或多种极性非质子溶剂，例如二甲亚砜(DMSO)。例如，DMSO属于极性非质子溶剂家族，其为水可混溶的。其他极性非质子溶剂包括但不限于：四氢呋喃、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺。那些溶剂与诸如聚电解质的聚合物强烈相互作用且能够妨碍氢键以及静电相互作用，这影响聚合物聚集和细胞黏附。所述释放溶液包含在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的DMSO。