[发明专利]经过修饰的因子IX多肽及其用途

说明书

对相关申请的介绍

本申请要求2009年7月31日提交的美国临时申请流水号61/230,551的优先权，并且通过述及收录在此用于所有目的。

发明领域

本申请涉及经过修饰的因子IX多肽，例如，展现升高的比活性的因子IX多肽和聚合物缀合的因子IX多肽。本申请还涉及用于生成经过修饰的因子IX多肽及其缀合物(conjugate)的方法，及使用经过修饰的因子IX多肽，例如，治疗罹患血友病B的患者的方法。

发明背景

血友病B影响1/34,500名男性，而且是由编码凝固因子IX(FIX)的基因中导致血液中FIX蛋白低或检测不到的各种遗传缺陷引起的(Kurachi，et al.，Hematol.Oncol.Clin.North Am.6：991-997，1992；Lillicrap，Haemophilia 4：350-357，1998)。FIX水平不足导致凝固缺陷和源自出血失控的症状。血友病B通过静脉内输注血浆衍生的或重组的FIX蛋白来有效治疗，或是停止已经开始的出血或是防止出血发生(预防)(Dargaud，et al.，Expert Opin.Biol.Ther.7：651-663；Giangrande，Expert Opin.Pharmacother.6：1517-1524，2005)。有效预防要求维持最低FIX谷水平为正常水平的约1％(Giangrande，Expert Opin.Pharmacother.6：1517-1524，2005)。由于天然FIX(血浆衍生的或重组的)的半衰期是大约18至24小时，FIX水平在推注后3至4天内下降至不到正常水平的1％，这就必须平均每三天重复注射以实现有效预防(Giangrande，Expert Opin.Pharmacother.6：1517-1524，2005)。这样频繁的静脉内注射对患者成问题，而且对实现有效预防成障碍(Petrini，Haemophilia 13Suppl 2：16-22，2007)，尤其在孩子中。比活性升高的FIX蛋白具有延长保护持续时间的潜力，因此具有显著的医学好处。

发明概述

本申请提供FIX多肽(也称作经过修饰的FIX多肽，FIX突变蛋白，或FIX变体)，其包含经过修饰以改善FIX比活性的氨基酸序列。在一些实施方案中，引入了一或多处氨基酸替代。在一些实施方案中，该多肽具有凝固活性。在一些实施方案中，该经过修饰的FIX多肽可包含氨基酸残基85，86，87，338，和410处的至少一处替代。

该经过修饰的FIX多肽可通过引入一或多处氨基酸替代，例如，用任何氨基酸替代来生成。例示性实施方案包括如下的FIX多肽，其包含一或多处替代诸如，但不限于：

(a)D85F；D85G；D85H；D85I；D85M；D85N；D85R；D85S；D85W；D85Y；V86A；V86D；V86E；V86G；V86H；V86I；V86L；V86M；V86N；V86P；V86Q；V86R；V86S；V86T；T87F；T87I；T87K；T87M；T87R；T87V；T87W；R338A；R338F；R338I；R338L；R338M；R338S；R338T；R338V；R338W；E410N；E410Q；

(b)D85W和T87R；D85F和T87I；D85W和T87W；D85R和T85R；D85I和T87R；D85Y和T87F；D85I和T87M；D85F和T87R；D85F和T87V；D85R和T87K；D85H和T87I；D85I和T87I；D85Y和T87K；D85S和T87R；D85Y和T87R；D85G和T87K；D85H和T87W；D85H和T87K；D85F和T87K；D85H和T87V；D85M和T87I；D85H和T87M；R338A和E410N；R338A和E410Q；