[发明专利]AXMI-205杀虫基因和它的使用方法

说明书

对相关申请的交叉参考

本申请要求在2009年7月2日提交的美国临时申请系列号61/222,778的权益，所述临时申请的内容完整并入本文作为参考。

发明领域

本发明涉及分子生物学领域。提供了编码杀虫蛋白的新基因。这些蛋白质和编码它们的核酸序列可用于制备杀虫制剂和生产转基因抗虫植物。发明背景

DDT(二氯-二苯基-三氯乙烷)的引入和随后向合成化学杀虫剂滥用的发展导致水和食品来源的污染、非靶标有益昆虫的被毒害和昆虫害虫对化学杀虫剂抗性的发展。在化学杀虫剂的滥用对环境的不利影响上增加的公众关注推动了寻找用于昆虫害虫控制的备选方法。

一种有希望的备选方案已经是使用生物学控制剂。有Bt(苏云金芽孢杆菌，一种革兰氏阳性土壤细菌)作为有效的生物杀虫剂的安全应用的详实记录并且可得到δ-内毒素基因在农作物植物中表达的很多报告。Bt转基因农作物只需要很少的杀虫剂喷雾，这不仅节约成本和时间，还减少了健康风险。在一些情况下，昆虫可以发展出对不同的杀虫剂化合物的抗性，所述抗性增加了鉴定用于害虫控制的备选生物学控制剂的需要。

发明概述

提供了赋予细菌、植物、植物细胞、组织和种子的杀虫活性的组合物和方法。组合物包括编码杀害虫和杀昆虫多肽序列的核酸分子、包含这些核酸分子的载体和包含该载体的宿主细胞。组合物也包括杀虫多肽序列和这些多肽的抗体。所述核苷酸序列可用于DNA构建体或者表达盒中用于在生物包括微生物和植物中的转化和表达。该核苷酸或者氨基酸序列可以是合成序列，其已经被设计用于在生物，包括但不限于微生物或植物中表达。组合物也包含转化的细菌、植物、植物细胞、组织和种子。

特别地，提供了编码杀虫蛋白的分离的或者重组的核酸分子。此外，包含了相应于杀虫蛋白的氨基酸序列。特别地，本发明提供分离的核酸分子，其包含编码在SEQ ID NO：2，3，4，5，6，7或者8中显示的氨基酸序列的核苷酸序列，或者在SEQ ID NO：1，9，10或者11中给出的核苷酸序列以及它们的变体和片段。也包含与本发明的核苷酸序列互补的核苷酸序列或者与本发明的序列杂交的序列。

提供了产生本发明的多肽和使用这些多肽来控制或者杀死鳞翅目害虫、鞘翅目害虫、线虫或者双翅目害虫的方法。也包括检测样品中本发明的核酸和多肽的方法和试剂盒。

本发明的组合物和方法在产生具有增强的害虫抗性或者耐受性的生物中是有用的。这些生物和组合物包含期望用于农业目的的生物。本发明的组合物对于产生具有杀虫活性的改变的或者改进的蛋白质，或者对于检测产品或者生物中杀虫蛋白或者核酸的存在也是有用的。

附图简述

图1显示了AXMI-205(SEQ ID NO：2)与来自发光光杆状菌(Photorh abdus luminescens)(SEQ ID NO：14)和密执安棍状杆菌(Clavibacter michiganensis)(SEQ ID NO：15)的MACPF蛋白的比对。

发明详述

本发明涉及在生物特别是植物或者植物细胞中调节害虫抗性或者耐受性的组合物和方法。“抗性”意指害虫(例如昆虫)在摄食或者与本发明的多肽接触时被杀死。“耐受性”意指害虫的运动、进食、繁殖或者其他功能的损伤或者减弱。所述方法涉及用编码本发明的杀虫蛋白的核苷酸序列转化生物。特别地，本发明的核苷酸序列可用于制备具有杀虫活性的植物和微生物。因此，提供了转化的细菌、植物、植物细胞、植物组织和种子。组合物是细菌种类的杀虫核酸和蛋白质。所述序列可用于表达载体的构建中用于随后转化到目的生物中，作为探针用于分离其他同源的(或者部分同源的)基因，或者通过本领域已知的方法如结构域交换或者DNA改组用于产生改变的杀虫蛋白。蛋白质可用于控制或者杀死鳞翅目、鞘翅目、双翅目和线虫类害虫种群并且用于产生具有杀虫活性的组合物。