[发明专利]多肽和治疗方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于抑制聚集蛋白聚糖酶，特别是ADAMTS5，由此降低软骨中聚集蛋白聚糖(aggrecan)分解的方法。

发明背景

软骨是由称作软骨细胞的专门化细胞建立的一种无血管组织，软骨细胞响应各种机械和生化刺激。软骨存在于关节衬里，间隙结缔组织，和基底膜中，而且由胞外基质构成，胞外基质由数种基质成分构成，包括II型胶原，蛋白聚糖，纤连蛋白和层粘连蛋白。

在正常软骨中，胞外基质合成被胞外基质降解抵消，导致正常基质周转。根据接收到的信号，随之发生的响应可以是同化的(导致基质生成和/或修复)或者是异化的(导致基质降解，细胞凋亡，功能丧失，和疼痛)。

响应有害压迫和/或炎性介导物(例如炎性细胞因子)暴露，软骨细胞降低基质生成并提高多种基质降解酶生成。基质降解酶的例子包括聚集蛋白聚糖酶(ADAMTS)和基质金属蛋白酶(MMP)。这些酶的活性导致软骨基质降解。聚集蛋白聚糖酶(ADAMTS)，连同MMP，降解聚集蛋白聚糖，即存在于关节软骨中的一种聚集性蛋白聚糖。在骨关节炎(OA)关节软骨中，在早期OA中的浅表区带中和在中度至重度OA中的软骨侵蚀区域附近观察到蛋白聚糖染色的丧失。

由聚集蛋白聚糖酶介导的聚集蛋白聚糖异化发生于聚集蛋白聚糖中的某些保守位点。已经显示了人ADAMTS4(在图5中显示为SEQ ID NO：44)和ADAMTS5(在图4中显示为SEQ ID NO：43)在氨基酸E373和A374之间切割聚集蛋白聚糖，产生尼奥表位(neoepitope)ARGSVIL(SEQ ID NO：1)。

胞外基质的过度降解涉及许多疾病和状况的发病机理，包括疼痛，慢性疼痛，神经性疼痛，手术后疼痛疼痛，类风湿性关节炎，骨关节炎，运动损伤，侵蚀性关节炎，强直性脊椎炎，神经痛，神经病，痛觉，神经损伤，缺血，神经变性，软骨降解，中风，失禁，炎性病症，肠易激综合征，牙周病，异常血管发生，肿瘤侵入和转移，角膜溃疡，和糖尿病并发症。

如此，需要能够抑制聚集蛋白聚糖酶活性和软骨降解的化合物。

发明概述

本发明提供了分离的多肽，其包含至少一个能够结合和/或中和人ADAMTS5的可变域。

还提供了分离的多核苷酸，其编码本发明的多肽。

还有，提供了药物组合物，其包含至少一种本发明的多肽。

本文中提供了用本发明的药物组合物来治疗罹患软骨疾病的患者的方法。

附图简述

图1：ADAMTS5单抗对ARGSVIL(SEQ ID NO：1)尼奥表位生成的体外抑制。

图2：7B4.1E11鼠单抗对ARGSVIL(SEQ ID NO：1)尼奥表位生成的体外浓度依赖性抑制。

图3：体内用选定ADAMTS5抗体或对照处理的小鼠的平均关节总分。

图4：人ADAMTS5的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)。

图5：人ADAMTS4的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)。

图6：人源化抗ADAMTS5抗体对重组抗原的结合。

图7：人源化抗ADAMTS5抗体对重组抗原的结合。

图8：人源化抗ADAMTS5抗体对重组抗原的结合。

图9：人源化抗ADAMTS5抗体对重组抗原的结合。

图10：ADAMTS5活性的百分比抑制。

图11：ADAMTS5活性的百分比抑制。

图12：纯化的抗ADAMTS5抗体对重组抗原的结合。

图13：结构建模预测抗原/抗体相互作用位点。

发明详述

“多核苷酸”一般指任何多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸，其抗原是未修饰的RNA或DNA或者是经修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA，为单链和双链区混合物的DNA，单链和双链RNA，和为单链和双链区混合物的RNA，包含可以为单链或更通常的双链或单链和双链区混合物的DNA和RNA的杂合分子。另外，“多核苷酸”指包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三链区。术语多核苷酸还包括含有一种或多种经修饰碱基的DNA或RNA和主链为稳定性或为其它原因经修饰的DNA或RNA。“经修饰”碱基包括例如三苯甲基化碱基和非常见碱基诸如肌苷。已经对DNA和RNA进行了多种修饰；如此，“多核苷酸”涵盖在自然界中通常找到的多核苷酸的化学，酶促或代谢修饰形式，以及病毒和细胞特征性的DNA和RNA的化学形式。“多核苷酸”还涵盖相对较短的多核苷酸，常常称作寡核苷酸。