[发明专利]抗刻缺蛋白-1抗体

说明书

本申请要求享有2009年6月18日申请的美国临时专利申请号61/218,193的权益，其内容以其全文援引加入本文。

发明领域

本发明涉及拮抗刻缺蛋白(Notch)-1活性的抗体，产生这类抗体的方法，测定这类抗体的方法以及使用这类抗体治疗癌症的方法。

背景

刻缺蛋白是跨膜受体蛋白。哺乳动物中存在4种这类刻缺蛋白受体。在受体成熟期间，哺乳动物刻缺蛋白受体的胞外域被弗林蛋白酶类蛋白酶在S1位点切割，产生胞外亚单位和跨膜亚单位，它们被异二聚化(HD)结构域结合在一起。与胞外亚单位结合的HD结构域的部分被称作HD-N，而HD的其他部分(跨膜亚单位的胞外部分)被称作HD-C。胞外亚单位包含大表皮生长因子(EGF)样重复区域和3个Lin12重复。EGF重复区域的配体结合诱导ADAM型金属蛋白酶在HD-C结构域内S2位点的蛋白水解切割，这触发γ-分泌酶在位点S3的后续切割，从膜释放刻缺蛋白的胞内部分，允许它进入细胞核并调节基因转录。(Gordon，W.R.，et.al，Nature Structural & Molecular Biology，2007，volume 14，295-300)。

在配体诱导的活化之前，刻缺蛋白保持保守负调节区域(NRR)的静止金属蛋白酶-抗性构像，所述NRR由3个Lin12重复和HD结构域组成。(Vardar et al.，Biochemistry 2003，41：7061-7067；Sanchez-Irizarry et al.，Mol.Cell.Biol.2004，24：9265-9273；Gordon，W.R.，et.al，Nature Structural & Molecular Biology，2007，volume 14，295-300)。刻缺蛋白的NRR有时还被限定为只由Lin12重复以及在S1位点蛋白水解切割后的N端HD结构域(HD-N)组成。(Weng，A.P.，et.al，Science，2004，9265-9273.)NRR结构域阻止刻缺蛋白途径不依赖配体的蛋白水解。

刻缺蛋白途径在多种发育和生理过程(包括影响蝇类和脊椎动物中神经发生的那些过程)中起作用。通常，刻缺蛋白信号转导参与侧抑制，谱系决定，以及细胞群之间边界的建立。(Bray，S.J.，Nature Reviews，2006，678-688)。

但是，刻缺蛋白活性还与各种人类疾病(包括癌症)有关。例如，在超过50％的T细胞急性淋巴母细胞性白血病中检测到刻缺蛋白1的突变。(Radtke，F，Nature Review，Cancer，2003，756-767)。需要鉴定调节刻缺蛋白-1信号转导途径以用于治疗癌症的治疗剂。

概述

在一个实施方案中，本发明提供一种分离的抗体或其抗原结合部分，其结合刻缺蛋白-1，其中所述抗体或抗原结合部分结合至少第一表位和第二表位，其中第一表位位于刻缺蛋白-1的Lin-A结构域内，第二表位位于刻缺蛋白-1的HD-C结构域内。优选刻缺蛋白-1是人刻缺蛋白-1。

在该实施方案的一个方面，第一表位是主要表位。优选地，第一表位任意氨基酸残基的非保守取代导致所述抗体或抗原结合部分与人刻缺蛋白1的结合亲和力损失超过60％，更优选超过80％，甚至更优选超过90％。

在另一个方面，第二表位是主要表位。优选地，第二表位任意氨基酸残基的非保守取代导致所述抗体或抗原结合部分与人刻缺蛋白-1的结合亲和力损失超过60％，更优选超过80％，甚至更优选超过90％。

在另一个方面，第一表位和第二表位都是主要表位。优选地，第一表位和第二表位的任意氨基酸残基的非保守取代导致所述抗体或抗原结合部分与人刻缺蛋白-1的结合亲和力损失超过60％，更优选超过80％，甚至更优选超过90％。

在该实施方案的另一个方面，刻缺蛋白-1是人刻缺蛋白-1。在该实施方案的另一个方面，刻缺蛋白-1是小鼠刻缺蛋白-1。

在该实施方案的另一个方面，所述抗体或抗原结合部分结合额外1-4个表位，其中所述额外表位的每一个均位于人刻缺蛋白-1的Lin-A结构域或HD-C结构域内。