[发明专利]活化的NK细胞的经保存的组合物及其使用方法

说明书

与相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请系列号61/224,771(2009年7月10日递交的)和美国临时申请系列号61/301,529(2010年2月4日递交的)的优先权，其中每个申请都在此以其全部通过引用而并入。

发明领域

本发明一般性地涉及显示出持久活化状态的经保存的天然杀伤细胞群、包含此类经活化的NK细胞的药物组合物，及它们的使用方法。

发明背景

癌症的过继免疫疗法考虑的是通过用特定的肿瘤细胞进行疫苗接种和/或施用更为一般性的免疫刺激物而直接刺激宿主对肿瘤的免疫应答。然而，数种因素可妨碍充分的抗肿瘤免疫应答，这包括缺乏合适的肿瘤相关抗原，有缺陷的抗原加工，由肿瘤产生免疫抑制性因子等。

过继免疫疗法通过直接向携带肿瘤的宿主施用有免疫活性的细胞或抗体而试图克服肿瘤介导的宿主免疫抑制。在过继性细胞疗法中，从携带肿瘤的宿主中分离免疫效应子细胞并且在再输注之前离体使其活化和/或扩增。例如，用重组的白介素-2(IL-2)离体活化了自体NK细胞以提高CD56+天然杀伤(NK)细胞的细胞毒性(Lanier et al.(1985)Journal of Immunology 134，794-801)并且产生经淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞，其能够在体外杀伤新鲜的自体和同种异基因性人肿瘤细胞(Rayner，et al.(1985)Cancer 55，1327-1333)。施用LAK细胞(通常与全身性IL-2输注相组合)已经作为用于人类癌症的过继免疫疗法经过了反复地研究。

然而，遗憾的是这些LAK细胞疗法在临床中仅遇到了有限的成功。首先必须从患者中获得自体细胞并且使其成功地离体扩增至足以用于治疗的细胞计数。此外，必须使LAK细胞持续地暴露于IL-2，以维持其活化的状态并且因此，有效的临床方案通常要求全身性施用高剂量的IL-2与细胞疗法相联合。虽然在一些患者中获得了一些抗肿瘤效果，由共施用IL-2引起的毒性是显著的问题(Vieweg et al.(1995)Cancer Investigation 13：193-201)，这包括发烧、发冷、全身乏力、关节痛、肌痛、和来自液潴的增重(Lotze，et al.(1985)J.Immunology 135：2865-2875)。

LAK细胞疗法的成功实施还被不能在实时个体化方案之外采用活化的LAK细胞所妨碍。特别地，需要特殊的设备和专门的实验室来分离、扩增和重输注每个患者的细胞。此外，LAK细胞的活性在去除IL-2后12小时内被显著损害，因此，一旦被活化，LAK细胞必须在丧失活化状态之前被迅速输注。重要地，LAK细胞的保存使得需要通过以IL-2进行再刺激而制备用于施用的LAK细胞，来重建活化的状态(Kawai et al.(1988)Transfusion 28：531-5；Schiltz et al.(1998)J.Immunother.20：377-86)。因此，施用LAK细胞用于癌症的免疫疗法具有有限的临床影响和认可，需要昂贵的、个体化的和劳动密集性的分离及扩增方法，以及实时施用来避免丧失活化。

因此，所需的是具有更可靠且持久的活性的经活化的免疫效应子细胞群，其可更好地促进细胞疗法与供体护理的协调。理想地，尽管保存，这些细胞仍可维持其活化状态而不持续暴露于活化剂和/或共施用不希望的和/或临床毒性试剂，从而使得更为一般性的临床应用可以是可能的。

发明概述

本发明提供经保存的、具有显著的抗肿瘤活性的活化的NK细胞群，尽管有之前的保存，其仍显示出令人惊讶地持久的活化状态，并且甚至在不存在活化剂时(例如，在结束与活化剂的接触后和/或不持续暴露于活化剂或以其再活化)亦如此。重要地且与LAK细胞不同地，本发明的经活化的NK细胞可在保存后直接被施用于患者而无需再活化并且也无需共施用活化剂本身，从而为医师提供了可持续的且即用的细胞治疗产品，其还避免了伴随着共施用活化剂的潜在毒性。

此外，可跨越同种异基因性障碍而有效地采用本发明的细胞群，并且重要地，过继性转移后，本发明的细胞群能够将杀肿瘤能力转移至内源性宿主NK细胞，从而在体内产生NK细胞活化级联。因此，本申请所提供的经活化的NK细胞群可被更一般性和更实际地用于主动和被动免疫疗法设置中，而无需个体化的治疗方案和/或实时施用方案。