[发明专利]色谱方法及其纯化的化合物

权利要求书

1.一种用于从具有至少一种相关杂质的混合物中纯化多肽的色谱方法，所述方法包括以下步骤：采用RP-HPLC，所述RP-HPLC利用浓度为约0.01％至约2％的离子对试剂连同浓度为约5％至约85％的有机改性剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，最优选地，所述离子对试剂和所述有机改性剂的浓度分别为约0.05％至约1％和约8％至约65％。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述离子对试剂选自由己烷磺酸、三氟乙酸、五氟丙酸、三乙胺和七氟丁酸组成的组。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述有机改性剂选自包括乙腈、乙醇、甲醇和异丙醇的组。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽选自包括胰岛素类似物、依替巴肽和阿托西班的组。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述胰岛素类似物是门冬胰岛素、赖脯胰岛素和甘精胰岛素。

7.一种用于从具有至少一种相关杂质的混合物中纯化多肽的色谱方法，所述方法包括以下步骤：

a)用基于二氧化硅(C₄-C₁₈)的树脂填充RP-HPLC柱，并用约5％至约85％的有机改性剂进行平衡；

b)以约180cm/h至约360cm/h的流速将所述多肽混合物装载到所述柱上；

c)用浓度为约0.05％至约1％的离子对试剂连同浓度为约5％至约85％的所述有机改性剂洗涤所述柱；以及

d)实施约10％至约70％的线性梯度，以从所述柱洗脱所述纯化的多肽。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述二氧化硅树脂优选为C₈。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述色谱纯化在约2.5至约8.5的pH下进行。

10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述树脂具有约5μ至约40μ的颗粒大小，优选为约7μ至约20μ，以及最优选为约10μ至约13μ。

11.根据权利要求7所述的方法，其中，所述树脂珠具有约至约的孔径大小，优选为约至约以及最优选为

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述多肽的纯度为约90％至约100％，优选为至少99％。

13.通过权利要求1至12中任一项所述的方法获得的一种胰岛素类似物，纯度为约90％至约100％。

14.纯化的门冬胰岛素，纯化后的纯度为至少98％。

15.纯化的甘精胰岛素，纯化后的纯度为至少99％。

16.纯化的赖脯胰岛素，纯化后的纯度为至少97％。

17.通过权利要求1至12任一项所述的方法获得的一种多肽，纯度为约90％至约100％。

18.纯化的阿托西班，纯化后的纯度为至少99.14％。

19.纯化的依替巴肽，纯化后的纯度为至少94％。