[发明专利]用于诊断阿兹海默氏病的过程和方法

说明书

本申请涉及用于在哺乳动物、特别是人类中检测阿兹海默氏病的方法和组合物。最值得注意的是，本申请描述了阿兹海默氏病的血清标志物及其在诊断方法中的应用。本申请还涉及用于实施所述方法的工具和/或试剂盒（试剂、探针、引物、抗体、阵列或芯片、细胞等）及其制备和应用。本发明可用于在哺乳动物中、包括在疾病的早期阶段中（包括在出现症状前或AD前阶段时）检测阿兹海默氏病的存在或进展。 

阿兹海默氏病是痴呆的主要原因，并且是最常见的神经变性疾病。这种渐进性发展的疾病，以记忆丧失和语言、定向和判断能力的降低为特征。通常与衰老相关的生理问题相混淆的症状的性质、它们的严重性以及它们出现的年龄，因人而异。这造成了这种疾病早期阶段诊断的困难。 

对患有这种疾病的患者的脑进行的检查，揭示了在记忆的重要区域海马中，以及参与推理、语言和记忆的大脑皮层中神经元的丧失。胆碱能神经元尤其受到这种减少的影响。 

在阿兹海默氏病患者的脑中观察到的另一个主要异常是细胞内和细胞外蛋白质聚集体的积累。细胞内τ蛋白的神经原纤维聚集体似乎与痴呆的严重性极为相关。由β-淀粉样肽的细胞内和细胞外聚集所形成的老年性斑块，是神经元和神经胶质细胞受到影响的区域的特征。 

然而，值得注意的是，这些聚集区域并不对应于认知功能降低特征性的突触减少的位点。 

对家族性疾病形式进行的遗传学研究显示，4个基因与疾病的发生相关：APP（淀粉样前体蛋白；β-淀粉样肽的前体）、早老蛋白1和2（PS 1和PS2）以及载脂蛋白E（ApoE）。尽管这些基因中的每个的突变或多态性能够引起β-淀粉样肽生产的增加，但对控制突触和神经元丧失的机制仍然了解得很少。就此而言，几种假说和机制似乎并存，由此暗示了各种现象： 

1涉及神经元和神经胶质细胞的纯粹脑现象： 

-氧化胁迫，其最引人注目的是可以由β-淀粉样肽诱导并受到胆甾醇代谢的调节； 

-钙流的变化和兴奋毒性。 

2炎性和免疫反应现象； 

3性激素的变化； 

4甲状腺机能减退和胰岛素信号传导调控中的缺陷。 

因此，阿兹海默氏病以整合体内平衡控制的各种系统的变化以及引起涉及免疫系统的炎性反应和内分泌调节的变化两者的对某些神经元的攻击为特征。后者反过来对其他神经元的活性和生存力以及免疫功能有影响，这些级联反应强调了不仅神经变性、而且激素调节和免疫应答也在阿兹海默氏病的发展中发挥作用。 

目前，没有阿兹海默氏病的强有力和特异性的特征物、尤其是来自血样的特征物可用于建立这种疾病、尤其是疾病的各种不同阶段的诊断。提供特别是疾病早期阶段的有效的诊断测试，将能使患者从疾病发作时进行治疗，从而获益于更有效和更定制的治疗，特别是在最佳条件下通过乙酰胆碱酯酶抑制剂例如加兰他敏、多奈哌齐和利伐斯的明进行治疗。 

本发明提供了对这种需求的响应。具体来说，本发明描述了用于阿兹海默氏病的血清标志物的鉴定，所述标志物能够开发这种疾病的存在、严重性或发展或者发生这种疾病的风险的有效和预测性的诊断 方法。因此，本发明描述了在患有阿兹海默氏病的患者的血液中鉴定特异性或偏好性表达的分子特征物，尤其是从经历了可选剪接的某些基因的复合表达产生的分子特征物。最引人注目的是，本发明描述了序列SEQ ID NOS.:1-1754的鉴定，所述序列存在于来自人类对象的血细胞的基因或RNA中，并且其单独或组合时是阿兹海默氏病所特有的。因此，本发明提供了根据在对象血液中测量一种或多种基因的表达来诊断、预测和/或监测阿兹海默氏病的进展的工具和方法。这些基因表达中解调控的存在，被用于在对象中确立（或证实）阿兹海默氏病的存在。 

因此，本发明的一个目的在于（体外或离体）检测或证实哺乳动物中阿兹海默氏病的存在的方法，所述方法包含在来自哺乳动物的生物样品、优选在血液（源于血液的）样品中确定一个或多个基因或RNA的表达变化的存在，所述基因或RNA包含选自SEQ ID NOS.:1-1754的序列，其中这种变化的存在指示了该哺乳动物中阿兹海默氏病的存在或发生阿兹海默氏病的风险。 

本发明的另一个目的涉及评估或监测对阿兹海默氏病治疗的响应的方法，所述方法包含在治疗前和/或治疗期间测量包含选自SEQ ID NOS.:1至1754的序列的一个或优选几个基因或RNA的表达，以及将如此测量到的表达与治疗前或治疗较早阶段时测量到的表达进行比较的步骤，其中所述表达的变化指示了对治疗的响应。