[发明专利]包含源自两种不同的微生物的内切葡聚糖酶的纤维素酶调制物

说明书

技术领域

本发明涉及一种包含源自两种不同的微生物的内切葡聚糖酶的纤维素酶调制物、该纤维素酶调制物的制造方法以及该纤维素酶调制物的用途。

背景技术

一直以来，为了对含纤维素的纤维赋予所需的特性，用纤维素酶进行处理。例如，在纤维行业中，为了改善含纤维素的纤维的手感及外观，或为了对被着色的含纤维素的纤维赋予提供其颜色的局部变化的“石洗”的外观，进行了利用纤维素酶的处理(专利文献1)。

到目前为止，通过由丝状菌等纤维素酶产生菌产生的纤维素酶复合物分离对含纤维素的纤维显示高活性的成分，来探索用于这样的用途的纤维素酶。其结果是，被分类为GH家族5、GH家族12及GH家族45的内切葡聚糖酶主要在含纤维素的纤维中作为显示高活性的纤维素酶被分离出来。例如，作为被分类为GH家族5的内切葡聚糖酶，已知源自绿色木霉(Trichoderma viride)的SCE3(专利文献2)，作为被分类为GH家族12的内切葡聚糖酶，已知源自嗜松青霉(Penicillium pinophilum)的PPCE(专利文献3)，另外，作为被分类为GH家族45的内切葡聚糖酶，已知源自坚孢葡萄单孢(Staphylotrichum cocosporum)的STCE(专利文献4)等。

在商业性地制造这些纤维素酶时，一般通过培养将编码该纤维素酶的基因导入到丝状菌等微生物而得到的转化体，作为重组酶使其大量表达来进行。此时，调制出的纤维素酶调制物相对于含纤维素的纤维的活性依赖于大量表达的重组纤维素酶的活性。同样，纤维素酶调制物的pH值特性也依赖于大量表达的重组纤维素酶的性质。例如，SCE3的情况，其最适pH值为弱酸性(专利文献2)，另外，PPCE的情况，其最适pH值为酸性(专利文献3)。因此，将它们各自作为重组酶大量表达而得到的纤维素酶调制物也显示与SCE3及PPCE同样的pH值特性。

迄今为止，为了进行纤维素酶调制物的活性的提高和/或性质的改变，主要尝试了探索显示期望的性质的新型纤维素酶、以及利用蛋白质工程学方法来改变现有纤维素酶。但是，为了得到显示与现有纤维素酶相比为飞跃性的优异的活性的纤维素酶，首先，不得不分离出新型的微生物，这本身就不容易。而且，该微生物等产生具有期望的性质的纤维素酶的可能性低。另外，即使利用蛋白质工程学方法在已知的纤维素酶中引入突变，也难以飞跃性地改变其性质。从这些问题考虑，目前的现状是无法得到兼备高活性和优异的pH值特性的纤维素酶调制物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：欧洲专利第307564号公报

专利文献2：国际公开第98/54332号小册子

专利文献3：国际公开第2008/111613号小册子

专利文献4：国际公开第2005/054475号小册子

发明内容

发明要解决的课题

本发明是鉴于这样的状况而完成的，其目的在于提供一种具有高活性且具有优异的pH值特性的纤维素酶调制物。本发明的目的还在于提供一种简便地生产这样的纤维素酶调制物的方法。

用于解决课题的方法

本发明者为了解决上述课题进行了潜心研究，结果发现，通过生产含有各一定比例以上的源自两种不同的丝状菌的内切葡聚糖酶的纤维素酶调制物，与单独表达各自的内切葡聚糖酶而得到的纤维素酶调制物相比，可得到惊人的高的针对含纤维素的纤维的活性。特别是通过使纤维素酶调制物中含有由源自绿色木霉(Trichoderma viride)的SCE3(分类为GH家族5)和源自嗜松青霉的PPCE(分类为GH家族12)构成的组合、或者由源自嗜松青霉(Penicillium pinophilum)的PPCE和源自坚孢葡萄单孢(Staphylotrichum cocosporum)的STCE(分类为GH家族45)构成的组合作为主要的纤维素酶，从而针对含纤维素的纤维的活性显著增加。另外判明：这样得到的纤维素酶调制物的pH值特性与单独表达各自的内切葡聚糖酶所得的纤维素酶调制物相比显示广泛的轮廓(profile)，通过组合两种内切葡聚糖酶，可以改变纤维素酶调制物的pH值特性。进而，本发明者发现，在这样的纤维素酶调制物的生产中，通过将编码源自两种不同的微生物的内切葡聚糖酶的DNA导入到同一宿主细胞中并使其表达，与将各自的内切葡聚糖酶单独导入到宿主细胞中并使其表达的情况相比，重组内切葡聚糖酶在分泌蛋白质中所占的比例提高，可得到高活性的培养上清液。