[发明专利]一种区分猪体和牛体明胶胶囊的方法

权利要求书

1.一种区分猪体明胶胶囊和牛体明胶胶囊的方法，包括步骤：

(a)利用硫酸铵沉淀法从所述明胶胶囊中提取蛋白质；和，

(b)根据它们的分子量利用凝胶电泳法分离所述蛋白质。

2.根据权利要求1所述方法，包括步骤：

(a)将150-400mg所述明胶胶囊溶解在9-11mL蒸馏水中，所述蒸馏水保持在水浴中温度为35℃-50℃；

(b)向步骤(a)中所述明胶溶液中加入0.835g硫酸铵盐，期间保持混合溶液处于搅拌状态；

(c)将步骤(b)中的所述混合溶液在搅拌条件下静置约30分钟；

(d)吸取步骤(c)中所述溶液混合物的1mL上清液至1mL微量离心管，期间保持所述混合溶液处于搅拌中；

(e)在14000rpm，35℃条件下，离心分离步骤(d)中的所述上清液20分钟，直至沉淀出析出的蛋白质；

(f)轻轻倒出所述上清液并收集所述析出的蛋白质；

(g)重新使所述蛋白质悬浮在TSE缓冲液中，在所述缓冲液中完全溶解所述蛋白质并摇动所述混合物约10秒钟至所述蛋白质在所述缓冲液中均质混合；

(h)将20μL步骤(g)中的所述溶液移至新的微量离心管中，所述离心管包含5μL样品缓冲液，摇动所述混合物并在95℃下加热所述混合物4分钟；

(i)对标准牛的和猪的样品重复步骤(a)-(h)；

(j)将步骤(h)和(i)中的每种样品和标准样品15μL装入7.5％8cm＊10cm聚丙烯酰胺凝胶孔中并将所述凝胶在200V条件下电泳分离50分钟；

(k)立即将所述凝胶移入容器中并浸入考马斯亮蓝染色液中1小时；

(l)去除所述染色液，所述凝胶在退色液中浸泡30分钟；

(m)然后换成新鲜的退色液再将所述凝胶浸泡30分钟；

(n)用VeraDoc成像系统抓取所述凝胶图像前，用蒸馏水浸泡所述凝胶；和

(o)用Quantity One 1-D分析软件(Bio-Rad，USA)分析所述图像。

3.如权利要求2所述方法，其中步骤(a)中所述明胶胶囊为150mg。

4.如权利要求2所述方法，其中步骤(a)中所述蒸馏水为10mL。

5.如权利要求2所述方法，其中步骤(a)中所述水浴为40℃。

6.如权利要求2所述方法，其中步骤(h)中所述混合物在装入所述聚丙烯酰胺凝胶孔前在沸水中加热4分钟。

7.如权利要求2所述方法，其中步骤(g)中所述TSE缓冲液为70μL。

8.如权利要求2或7所述方法，其中所述TSE缓冲液包括12.5mL的40mMTRlS，5mL的10％(w/v)SDS，pH 8.8，0.01861g的1mM EDTA和32.5mL的蒸馏水，总体积为50mL。

9.如权利要求2所述方法，其中步骤(h)中的所述样品缓冲液包括3.8mL的蒸馏水，1.0mL的0.5M Tris-HCl，pH 6.8，0.80mL的甘油，1.6mL的10％(w/v)SDS，0.4mL的2β-巯基乙醇，0.4mL的0.05％(w/v)溴酚蓝，总体积为8.0mL。

10.如权利要求9所述方法，其中新鲜加入所述2β-巯基乙醇。

11.如权利要求2所述方法，其中步骤(k)中所述考马斯蓝染色溶液包括500mL的蒸馏水，1.0g的0.1％(w/v)考马斯蓝R250，400mL的甲醇(40％v/v)和100mL的乙酸(10％v/v)，总体积为1.0L。

12.如权利要求2所述方法，其中步骤(l)中所述退色液包括500mL的蒸馏水，400mL的甲醇(40％v/v)和100mL的乙酸(10％v/v)，总体积为1.0L。