[发明专利]活化的白细胞组合物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求享有2009年3月5日提交的名称为“活化的白细胞组合物”的第61/209,298号申请和2009年4月1日提交的名称为“用于血管机能不足的活化的白细胞组合物”的第61/211,587号申请的权益，其公开的内容在此通过引用并入本文。

背景技术

伤口愈合过程涉及白血细胞(也被称为白细胞)的参与。白细胞包括淋巴细胞、粒细胞和单核细胞。三种常见的淋巴细胞类型是T细胞、B细胞和天然杀伤细胞。T细胞和B细胞在体内抗原识别中发挥重要作用(Parkin，2001)。天然杀伤(NK)细胞通过主要组织相容性复合体(MHC)水平的变化识别被感染的细胞，并杀死被感染的细胞(Moretta，2008)。愈合过程中淋巴细胞的参与在很大程度上与其产生细胞因子和生长因子有关(Keen，2008)。已经描述了皮肤中的一类新型γ-δ-T细胞(Jameson，2002.Havran，2005)。粒细胞的不同类型是嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。单核细胞分化成为巨噬细胞，后者负责清除组织碎片或者侵入的外源物质。巨噬细胞还产生控制炎症和修复的分子(Riches，1996)。

伤口愈合过程存在3个重叠的时期(Li，2007；Broughton，2006，-Tsirogianni，2006；Singer，1999；Martin，1997)。第一个时期是炎症期。其特征是招募嗜中性粒细胞，随后招募单核细胞至伤口位点，在此处将细菌杀死并吞噬(Agaiby，1999)。

伤口愈合的第二个时期被称为增殖期，其涉及形成新的肉芽组织。成纤维细胞增殖并迁移至伤口区域，合成胶原和其他胞外基质组分(Greiling，1997)。同时发生血管新生，为代谢活跃的新肉芽组织提供营养物质和氧气(Tonnesen，2000)。完整表皮中的角化细胞开始迁移经过临时基质并开始增殖，为新的上皮组织做准备(Kim，1992)。

重塑是伤口愈合中的第三个和最后一个时期。其特征是成纤维细胞分化成为肌成纤维细胞，后者相互接触并使伤口边缘更加接近(Tomasek，2002)。通过降解和重新合成而进行的胶原纤维重塑通过胶原纤维的重新定位(由细胞因子严密控制的过程)使得伤口获得强度(Werner，2003)。

处理伤口的挑战通常在患有多种病症(例如糖尿病、冠状动脉疾病和高血压)的患者中复杂化。由于多种生理条件，这些疾病具有使血管并发症恶化的共同效应。伤口的并发症可以导致发病率和死亡率增加(Doshi，2008)。

常规的伤口处理包括外科清创术、抗生素治疗和多种敷料(Moran，2008；Fonder，2008)。抵御常规处理的伤口也被称为难治性伤口。这些伤口使得生活质量下降，并可以导致发病率和死亡率增加。因此，对有效的伤口愈合组合物和方法的需求持续存在。

发明简述

本发明的一个方面是针对制备来源于血液的活化的白细胞组合物(ALC)(例如从全血样品中可获得或者已经获得)的方法。该方法包括将白细胞(可以从人全血中获得)在一定温度下第一孵育一段时间的步骤，这使得白细胞开始活化，在优选的实施方案中，所述孵育是于室温进行大约8至大约20小时。孵育后，使白细胞与生理上可接受的水溶液(例如无菌蒸馏水)相接触，以引发低渗休克，随后使休克的白细胞与生理上可接受的盐溶液相接触，以恢复等渗性。该活化的白细胞组合物(ALC)可以用于治疗。但是，在一些实施方案中，与白细胞的第一孵育分开和基本同时，与白细胞孵育的同时使可以从相同或者不同的全血样品中(即从相同或者不同的人中)获得的血浆样品与凝固剂于37℃相接触，在优选的实施方案中，所述接触是大约8至大约20小时，随后从已凝固的血浆样品中分离血清。将白细胞重悬于从已凝固的血浆样品中收集的血清中，因而形成ALC。第一孵育后，可以将白细胞进一步于37℃第二孵育大约60至大约120分钟。