[发明专利]具有产生甲基萘醌的优异能力的菌株

说明书

技术领域

本发明涉及具有产生甲基萘醌的优异能力的菌株。

背景技术

甲基萘醌(menaquinone)或维生素K2参与蛋白中某些谷氨酸残基的羧化以形成γ-羧基谷氨酸残基(缩写为Gla-残基)。改性残基通常(但不总是)位于称为Gla域的特定蛋白域中。Gla-残基通常参与钙的结合。Gla-残基对所有已知的Gla-蛋白的生物活性而言均是必不可少的(Furie B，Bouchard BA，Furie BC；Blood 93(6)：1798-808)。迄今为止，已经发现14个具有Gla域的人蛋白，它们在三种生理过程的调控中起着关键作用，例如血液凝固(凝血酶原(凝血因子II)、凝血因子VII、IX、X、蛋白C、蛋白S和蛋白Z)；骨代谢(骨钙蛋白，也称为骨Gla-蛋白(BGP)和基质Gla蛋白(MGP)；以及血管生物学。

因此，甲基萘醌缺乏症可以诱导若干病理，例如出血、凝固机能障碍、骨质疏松症.....。通常，被认为特别易患甲基萘醌缺乏症的患者群体是新生儿、老年人、患有肝、胆或肠机能障碍的患者和长期用抗生素治疗的患者。

现有技术建议了补充这些患者的甲基萘醌缺乏的若干方法。这些方法中的一种是向这些患者施用产生甲基萘醌的细菌。事实上，甲基萘醌由肠内菌丛产生，尤其由大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)和类杆菌(Bacteroides)亚种类的细菌产生。甲基萘醌也由若干乳酸菌产生，例如双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳酸球菌属(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、肠球菌属(Enteroccocus)和丙酸杆菌属(Propionibacterium)。特别是，最近已经在WO 2008/040793中公开能够比相应的野生型菌株产生更多甲基萘醌的乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)的特定变种。

然而，拥有能够产生更多量甲基萘醌的菌株是非常令人感兴趣的。

发明简述

本发明涉及具有产生甲基萘醌的优异能力的菌株。事实上，本发明人在他们的研究期间发现本发明的特定菌株具有比迄今为止已知的其他菌株更优异的产生甲基萘醌的能力。这些菌株已经根据布达佩斯条约以以下保藏号保藏：CNCM I-4128、DSM 23476、DSM 23477、DSM 23478、DSM 23479。本发明尤其涉及这些菌株及其变种在产生甲基萘醌中的用途。

发明详述

本发明涉及具有比迄今为止已知的其他菌株更优异的产生甲基萘醌的能力的菌株。

本发明的一个目的涉及由Danisco France SAS(20，rue de Brunel，75017 Paris，France)根根据布达佩斯条约于2009年2月24日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)(CNCM，Institut Pasteur，25，rue du Docteur Roux，75724 Paris cedex 15，France)的保藏号为CNCM I-4128的乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)的菌株或其变种。菌株CNCM I-4128或其变种产生大量甲基萘醌。特别地，本发明人显示，当用试验A测定时，每100g用所述菌株发酵的乳液中，菌株CNCM I-4128产生至少7μg的甲基萘醌。

通常，当用本发明试验A测定时，每100g用所述变种发酵的乳液中，菌株CNCM I-4128的变种产生至少7μg，特别地至少8μg，更特别至少9μg，更特别至少10μg，更特别至少11μg，最特别至少12μg的甲基萘醌。

试验A在实验部分完整描述。简言之，试验A包括以下步骤：

-用5.10⁴到10⁷cfu/mL的待测试菌株接种含有100mL脱脂UHT乳液的两个烧瓶，

-在不搅拌下在23℃到30℃范围中选定的恒温水浴中培养接种的烧瓶，

-用Cinac System(Ysebaert System)的pH探针测定并记录两个烧瓶之一的pH变化，

-当pH到达4.60+/-0.1时，将没有测定pH的烧瓶温度冷却到6℃以停止培养，

-将所述烧瓶在6℃下贮存14h到20h，

-手工均化乳液，