[发明专利]基于Ⅲ型纤连蛋白结构域的支架组合物、方法及用途

权利要求书

1.一种基于III型纤连蛋白(FN3)结构域的分离的蛋白质支架，所述分离的蛋白质支架包含衍自FN3结构域的共有序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与共有FN3结构域序列具有至少75％同一性。

2.一种基于III型纤连蛋白(FN3)结构域的分离的蛋白质支架，所述分离的蛋白质支架包含衍自纤连蛋白FN3结构域的共有序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：16具有至少75％同一性。

3.根据权利要求2所述的蛋白质支架，其包含7条链和各链之间的6个环。

4.根据权利要求3所述的蛋白质支架，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列并在SEQ ID NO：16的残基13-16、22-28、38-43、51-54、60-64和75-81处形成能够结合细胞蛋白质和/或核酸分子的环。

5.根据权利要求3所述的蛋白质支架，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列并在SEQ ID NO：16的残基13-16、22-28、38-43、51-54、60-64和75-81处形成能够结合细胞蛋白质和/或核酸分子的环，其中所述环中的一个或多个被改变以结合靶标。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的蛋白质支架，其中所述支架以至少一种选自以下的亲和力结合靶标：至少10^-9M、至少10^-10M、至少10^-11M、至少10^-12M、至少10^-13M、至少10^-14M和至少10^-15M，所述亲和力通过表面等离子共振或Kinexa方法测定。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的蛋白质支架，其中所述环形成用于结合靶标的位点。

8.一种构建基于III型纤连蛋白(FN3)结构域的蛋白质支架的文库的方法，所述方法包括以下步骤：

提供具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的多肽；和向所述具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的多肽的各个拷贝中引入多样性以形成所述蛋白质支架文库。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述引入多样性步骤包括使至少一个选自SEQ ID NO：16的残基13-16、22-28、38-43、51-54、60-64和75-81的环区域突变。

10.一种文库，所述文库通过根据权利要求9所述的方法产生。

11.一种产生以预定的结合亲和力结合特定靶标的蛋白质支架的方法，所述方法包括使根据权利要求10所述的文库与所述特定靶标进行接触，并分离出以所述预定的亲和力结合所述特定靶标的蛋白质支架。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述分离步骤包括分离结合所述特定靶标的支架分子并测试所述分离的支架分子与所述特定靶标的结合亲和力。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述亲和力小于或等于约10^-7M。

14.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子编码根据权利要求1-5中任一项所述的蛋白质支架。

15.根据权利要求14所述的分离的核酸分子，其包含SEQ ID NO：17中所示的核苷酸序列。

16.一种分离的核酸载体，所述分离的核酸载体包含根据权利要求14所述的分离的核酸分子。

17.一种原核生物或真核生物宿主细胞，所述原核生物或真核生物宿主细胞包含根据权利要求14所述的分离的核酸分子。

18.根据权利要求17所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为选自以下的至少一者：大肠杆菌BL21Star(DE3)、其他大肠杆菌细胞、酵母细胞、COS-1细胞、COS-7细胞、HEK293细胞、BHK21细胞、CHO细胞、BSC-1细胞、Hep G2细胞、653细胞、SP2/0细胞、293细胞、HeLa细胞、骨髓瘤细胞或淋巴瘤细胞，或者它们的任何衍生物、无限增殖化细胞或转化细胞。

19.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1-5中任一项所述的蛋白质支架和至少一种可药用载体或稀释剂。