[发明专利]能与人B淋巴细胞上的mIgE结合的抗CεmX抗体

说明书

发明背景

IgE在介导I型超敏反应中起到决定性作用，I型超敏反应负责导致的过敏性疾病，包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎等。过敏性反应是免疫系统对无害环境物质的应答，所述环境物质例如尘螨、树木和草的花粉、某些食品和药物以及蜜蜂和火蚁叮咬。在这些反应中，过敏原与嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面IgE的结合引起IgE交联和相关IgE.Fc受体的聚集，所述IgE.Fc受体为I型IgE.Fc受体或FcεRI。该受体聚集随后激活信号途径，导致颗粒的胞吐和药理介质的释放，所述药理介质例如组胺、白三烯、类胰蛋白酶、细胞因子和趋化因子。那些介质从肥大细胞和嗜碱性粒细胞的释放导致过敏反应的各种病理表现。

已经开发出用于治疗IgE介导的过敏性疾病的抗IgE的抗体，该抗体与血液和组织液中的游离的IgE和B细胞上的mIgE结合，但是不与嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的FcεRI所结合的IgE结合。利用人源化抗IgE抗体即奥马珠单抗(商品名Xolair)的治疗在多种过敏性病症中表现出弱化I型超敏性的多重药理作用。抗体与IgE在Fc的CH3结构域中的位点高亲和力结合，该位点与FcεRI的结合位点重叠。因此，该疗法基于抗体与游离IgE和B淋巴母细胞和记忆B细胞上的mIgE的结合，这导致血液和组织液中总的游离IgE水平下降。

抗IgE与游离的IgE的结合进一步阻止IgE与嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面上的FcεRI的结合。由于未被IgE占据的FcεRI不稳定，且随后内化并降解，以抗IgE结合耗尽游离的IgE也逐渐下调嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的FcεRI。已经发现了抗体疗法其它作用的证据，包括中和细胞因子活性、弱化总炎性活性和可能通过IgE-抗-IgE免疫复合物的累积清除过敏原。

本发明的发明人之一(T.W.Chang)发现，IgE除了与奥马珠单抗结合的位于CH3上的抗原位点之外，被称为CεmX的另一个抗原位点存在于人mIgE上，用于靶向表达mIgE的B淋巴细胞。CεmX是位于人膜结合ε链(mε)的CH4结构域和C末端膜锚定片段之间的52个氨基酸的片段。在大多数所研究的人个体中，已经证明，没有CεmX的mε(mε_S)占有极小的比例，而具有CεmX的mε链(mε_L)优势表达。游离、分泌型IgE的ε链的mRNA和mIgE的mε_S和mε_L的mRNA都来源于εRNA转录本的可选剪接。CεmX的氨基酸和核苷酸序列在整个蛋白和DNA数据库中是唯一的。因此，CεmX为靶向mIgE和表达mIgE的B细胞提供了特有的抗原位点。

Chang的研究组以前报道了所开发的数种CεmX特异性小鼠单克隆抗体，包括a20在内，这些抗体能与含有CεmX片段的重组蛋白和SKO-007细胞系的细胞结合，并且能与CHO细胞系的细胞结合，所述SKO-007细胞系是表达人mIgE的人骨髓瘤来源的细胞系，所述CHO细胞系用对应于mε_L的CH2结构域至细胞质末端的片段(mε_L(CH2-CM)；CM：细胞质)的基因转染。单克隆抗体a20及其所有早期开发的抗体均被发现与位于52a.a.CεmX结构域C末端的8-a.a.肽区域、RADWPGPP、残基#45-52结合。

发明概述

本发明涉及对人mIgE的CεmX结构域具有特异性并能与人B淋巴细胞上的mIgE结合的抗体的开发和鉴定。本发明还涉及这些抗体在治疗由IgE介导的过敏性疾病和其他疾病中的应用。

在研究由Chang的研究组开发的抗CεmX单克隆抗体a20的过程中，发现a20与mε_L(CH2-CM)基因所转染的细胞系的结合较好，所述细胞系，例如CHO细胞系或NS0细胞系，不表达Igα(CD79a)、Igβ(CD79b)、CD21、CD19、CD81和其他与B细胞受体(BCR)相关的蛋白。然而，发现a20与mε_L(CH2-CM)基因所转染的表达Igα、Igβ和其他BCR相关蛋白的细胞系结合不良，例如Ramos细胞系。我们设想，a20所识别的位于CεmX上的抗原表位可能被某些BCR相关蛋白封闭。因此，a20单克隆抗体及其嵌合或人源化版本不适于在体内用于人类患者中，用于靶向表达mIgE的B淋巴母细胞和记忆细胞的目的。