[发明专利]新型受体结合配体及其在检测具有生物学益处的细胞中的用途

说明书

病毒受体结合结构域(RBD)特别发现于病毒的包膜糖蛋白(Env)中，其能够结合不同靶细胞的膜受体。

修正基因缺陷的基因治疗策略基于逆转录病毒具有的转移基因的性质，所述逆转录病毒的Env由实验员选择。

用于治疗γ链的免疫缺陷的两个临床研究基于由γ逆转录病毒衍生的载体介导的基因至人造血干细胞内的转移(Cavazzana-Calvo；Science 2000和Gaspard；Lancet 2004)。

然而，两个研究的结果极不相同并且对于一些患者，以不同的速率发生淋巴组织增殖性疾病。

本发明的一个目的是提供用于检测存在于靶细胞中的膜受体的新型受体结合配体。

本发明的另一个目的是提供基于膜受体的特征性阵列鉴定靶细胞，特别是干细胞和其衍生的细胞的鉴定方法。

本发明的另一个目的是提供用于选择具有生物学益处(biological interest)的细胞(特别是干细胞和其衍生的细胞)的亚群的实现方法。

本发明的另一个目的是提供扩增选择的靶细胞的扩增方法。

本发明的另一个目的是提供检测特定膜受体在具有生物学益处的靶细胞上的存在的检测方法。

本发明的另一个目的是提供获得所述受体结合配体的方法。

本发明涉及至少2种衍生自与细胞关联受体(cognate receptor)相互作用的有包膜病毒的糖蛋白的可溶性部分的可溶性受体结合配体用于鉴定和定量存在于靶细胞的表面上的膜受体的表达的用途，

-所述受体结合配体包含所述糖蛋白的受体结合结构域(RBD)之一的一部分或全部，和，

-所述可溶性受体结合配体易于与靶细胞的至少一种膜受体相互作用，

所述鉴定和定量在给定的时间上或在给定的时间间隔期间进行，并且允许确定所述靶细胞的生理状态。

术语“配体”是指多肽。

表述“衍生自有包膜病毒的糖蛋白的可溶性部分”意指受体结合配体是病毒的包膜中包含的糖蛋白的片段或部分并且可以例如通过克隆获得。

术语“糖蛋白”是指包膜糖蛋白、衣壳糖蛋白(coat glycoprotein)或融合糖蛋白。

表述“与细胞关联受体相互作用”意指糖蛋白易于被存在于细胞表面上的受体识别。

可向糖蛋白的该片段或部分的肽序列加入、缺失或置换一个或多个氨基酸。

可化学修饰包含RBD的部分或全部的受体结合配体，以添加荧光染料。

RBD特别地发现于病毒的包膜的糖蛋白中，因此，受体结合配体包含完整RBD或所述RBD的片段或部分。

所述RBD的部分或全部易于与靶细胞的至少一种膜受体相互作用。

“靶细胞”意指呈现锚定在细胞的膜内的受体的特征性阵列的具有生物学益处的细胞。

可以从哺乳动物，例如哺乳动物细胞，特别是人类细胞，更具体地干细胞(优选在分化过程中)，或从癌细胞分离靶细胞。

干细胞的实例(但不限于它们)是胚胎干细胞、造血干细胞、神经和间质前体干细胞(neural and mesenchymatous precursor stem cell)、癌症干细胞。

还可从组织或器官分离靶细胞。

病毒的糖蛋白的RBD能够结合靶细胞的一种或多种膜受体。

“膜受体”，其在本文中被定义为锚定在细胞质膜中的任意蛋白质或多肽。所述膜受体允许与病毒的糖蛋白相互作用。

优选地，根据本发明的膜受体是用作转运蛋白例如营养物和代谢物转运蛋白的多次跨膜蛋白家族的成员，即允许营养物和代谢物运输穿过质膜的多次跨膜蛋白。

所有哺乳动物细胞通过细胞表面上的“营养物或营养品转运蛋白”吸收必需营养物并且排出分解代谢产物和其他成分，从而允许细胞存活(细胞凋亡的抑制、自噬的抑制、增殖等)。

营养物或营养品以及代谢物或分解代谢产物是例如碳水化合物、氨基酸、无机磷酸盐、核苷、脂质、维生素、血红素、离子等。

该靶细胞必须被所述RBD识别。

表述“所述受体结合配体易于与至少一种膜受体相互作用”意指，所述受体结合配体通过RBD与靶细胞的受体或靶细胞的若干受体形成复合物。

可溶性受体结合配体还可包含超过1个的RBD(以其完全或部分序列)。

因此可在其中之前已从动物分离靶细胞的情况下体外形成复合物。

还可离体形成复合物。