[发明专利]利用免疫层析法的变应原检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用免疫层析法的变应原的检测方法和可在其中使用的免疫层析用变应原的检测试剂盒，所述方法中，使用阴离子型表面活性剂和硫代硫酸盐从含有各种变应原的食品等被测试样中提取各变应原，不论是各变应原为变性/未变性的哪一状态，都可用阴离子型表面活性剂和硫代硫酸盐、或阴离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂高效地提取，此外，可抑制伴随着结合于抗体的胶体金的崩解的非特异性反应、而迅速地进行检测。

背景技术

由于自然环境的减少、从车辆和工厂等排放的废气、居住情况等、或食物的变化等各种因素，现今，据说3人中就有1人患有某种过敏疾病。尤其是，食物过敏是食品中含有的过敏诱发物质（下面称为食物变应原）的摄取所引起的有害免疫反应，引起皮炎、哮喘、胃肠道紊乱、过敏性休克等，随着这种食物变应性患者的增加，在医学上和食品工业上产生深刻的问题。这些危害有时导致死亡，故需要在其发生前实施处置。因此，通过标示（indication）来向消费者提供信息的必要性提高，FAO/WHO联合食品标准委员会，针对含有已知为过敏物质的8种原材料的食品，就含有其的要旨的标示达成一致，认为成员国应探讨适于各国制度的标示方法（1999年6月）。在日本，考虑到过去的健康危害等的程度、频率而对引起过重症变态反应症状的24种食品规定了其标示方法（2002年4月起施行）。作为引起变态反应的食品，已知有蛋类、乳类、肉类、鱼类、甲壳类和软体动物类、谷类、豆类和坚果类、果实类、蔬菜类、啤酒酵母或明胶等。

为了迅速简便地检测上述变应原，作为利用依赖于抗原-抗体的特异性反应检测由特定的抗原或抗体构成的被检测物质的免疫测定法，通过免疫反应使样品中的被检测物质与对微粒敏感的抗体或抗原结合，测定由于结合而产生的微粒的凝集状态的凝集法是简便的免疫测定法，尤其是从可以目视判断这点考虑，是通常使用的方法。

此外，利用免疫反应使试样中的被检测物质与由包括放射性同位素、酶或荧光物质的标记物质标记的抗体或抗原结合，测定该结合的标记物质的放射免疫测定法、酶免疫测定法或荧光免疫测定法也正在被采用。在这些免疫测定法中，竞争型反应、夹心型反应正在被广泛使用。其中，作为所谓的夹心型反应的测定法，已知有免疫层析法（例如，参照专利文献1），除了归因于抗原抗体反应的高特异性之外，以简便、迅速为特征的各种变应原检测试剂盒正在被销售。

作为适用于所述免疫层析法的试样，有生物试样和来自食品的提取物等，但是根据试样的种类不同，有时尽管不存在标本（specimen），也会发生在捕获部位呈现淡显色的所谓非特异性反应，有时导致检测的准确性的降低。因此，提出了防止测定时的非特异性凝集和非特异性反应，因而可高准确度地进行测定的展开溶剂，其特征在于，在缓冲液中以0.005~0.3w/v％的浓度含有具有磷酸胆碱基团的聚合物且该聚合物的数均分子量为40,000以上（例如，参照专利文献2）。

此外，在上述免疫测定法中，在由于对蛋白质加热或加压等而发生变性等时，确认到测定结果变低或不能测定的情形。作为特定原材料的检测方法，在由厚生劳动省发出的食安发第0122001号中收载的夹心ELISA法中，为了充分地从加热过的被测试样中提取各变应原，利用使用了变性剂和还原剂（2-巯基乙醇）的提取溶液进行提取的方法正在被采用。其应用了传统上一直使用的蛋白质的分析中使用的SDS-聚丙烯酰胺电泳法的样品制备方法，认为变性剂和还原剂对于提高各变应原从被测试样的提取效率是必不可少的。此外，当将其应用于免疫层析法时，因为可观察到很多非特异性反应，所以不能正确检测，在测定变性蛋白质时成为问题。

本申请人提出了利用使用了变性剂和还原剂的提取溶液进行提取，即使在应用于免疫层析法时，也可抑制伴随着胶体金的崩解的非特异性反应，而迅速且精度良好地检测变应原的免疫层析法（例如，参照专利文献3参照）。该方法中，可充分地从加热过的被测试样中提取各变应原，而且可利用简便的免疫层析法检测，因此可飞跃性地提升精度和简便性。但是，使用的还原剂（2-巯基乙醇）有特殊的气味，并且2-巯基乙醇从2008年7月1日起被指定为有毒物质，因此，在食品制造工厂等中的简便的使用变得困难。因此，期求更安全有效的提取方法，和在将其应用于免疫层析法时观察不到非特异性反应而可正确地检测的免疫层析法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平5-010950号公报

专利文献2：日本特开2003-344406号公报

专利文献3：日本特开2007-278773号公报。

发明内容