[发明专利]减毒活疫苗

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2009年2月20日提交的澳大利亚临时专利申请第2009900736号的优先权，通过引用将该申请全文并入本文。

技术领域

本发明涉及可用在疫苗组合物中的在个体中维持的减毒活细菌的产生，具体而言，本发明涉及去除细菌的至少一种ABC-转运蛋白的功能，从而产生在个体中维持并可用在疫苗组合物中的减毒细菌。

背景技术

细菌感染由于导致发病和大量死亡而对畜牧业造成巨大的经济损失，并且对人类健康具有显著影响。具体而言，呼吸道感染和败血病是常见的感染性疾病，其可在整个动物群或人(个体)群中蔓延并对那些个体的健康产生不利影响。这可导致生产率显著下降，并最终导致个体的死亡。例如病原菌，尤其是支原体属属(Mycoplasma)的病原菌是呼吸道疾病的主要诱因。败血病通常由大肠杆菌(E.coli)引起。

据了解，包含经减毒的诸如细菌或病毒的病原微生物的疫苗组合物可在被接种的动物和人体中有效产生保护性的免疫应答。这种减毒活疫苗是有利的，因为免疫后，由疫苗所依赖的病原有机体所产生的后续激发导致最初由接种所诱导的免疫应答的快速再次激发。该作用为抑制病原体增殖并防止临床相关疾病的发展。

通常，通过完全或部分去除一种或多种毒力因子使得有机体不再是病原性的来实现用在疫苗中的病原有机体的减毒。所公知的毒力因子具有直接致病和/或允许有机体在宿主中维持的那些特性。促进有害宿主应答的那些特性也是公知的毒力因子。通常的毒力因子包括例如，毒素、附着胞器(attachment organelle)和免疫逃避机制。这提出的问题在于多种毒力因子参与诱导免疫，并且因此毒力因子的缺失使得以这种方式被减毒的有机体的免疫原性减弱。减毒活疫苗优选仍是抗原性的，并且因此能诱导充足水平的宿主免疫，同时是非病原性的。通常，减毒活疫苗不在个体中维持，并且这可归于疫苗所依赖的减毒活有机体的免疫原性的降低。

尽管诸如毒素的某些毒力因子是用于减毒的明显靶标，但是不被认为是毒力因子的因子不是用于减毒的明显靶标。那些因子对有机体毒力的减毒效应不明显或不容易预测。ABC(ATP-结合盒)转运蛋白超家族的成员通常不被认为是毒力因子。ABC转运蛋白包含功能是穿过细胞内膜和细胞外膜转送底物的膜蛋白。由ABC转运蛋白运送的物质包括肽、寡肽、蛋白质、代谢产物、脂质、固醇和药物。ABC转运蛋白的序列比较表明，该超家族的基因和蛋白质在远源相关的门类中是保守的。

本发明基于这个出人意料的发现：如在在宿主-疾病模型系统中所评价的，病原有机体中ABC-转运蛋白基因的功能突变缺失使该病原有机体减毒，但是该减毒有机体保持免疫原性，且在个体中维持。

发明概述

第一方面，提供了通过至少一种ABC转运蛋白基因的突变而被减毒的细菌，其中所述突变使得相应的ABC转运蛋白没有功能，并且其中所述减毒细菌在个体中维持。

第二方面，提供了使细菌减毒的方法，所述方法包括使至少一种ABC转运蛋白基因突变，并且其中所述减毒细菌在个体中维持。

第三方面，提供了包含至少一种第一方面的减毒细菌的免疫原性组合物。

第四方面，提供了疫苗组合物，包含免疫原性有效量的至少一种第一方面的减毒细菌和药理学上可接受的载体。

第五方面，提供了用于治疗或预防疾病的疫苗组合物的用途，其中所述疫苗组合物包含至少一种第一方面的减毒细菌。

第六方面，提供了预防或改善个体疾病的方法，所述方法包括给予所述个体治疗有效剂量的疫苗组合物或免疫原性组合物，其中所述疫苗组合物或免疫原性组合物包含至少一种第一方面的减毒细菌。

第七方面，提供了预防疾病的方法，所述方法包括给予需要预防的个体治疗有效剂量的疫苗组合物或免疫原性组合物，其中所述疫苗组合物或免疫原性组合物包含至少一种第一方面的减毒细菌。

在一个实施方案中，可以通过插入、缺失、取代或以上的任意组合来产生突变，所述插入突变例如可以通过同源重组、转座子诱变和序列标签诱变来产生。

在一个实施方案中，所述ABC转运蛋白基因可以是编码ABC-肽转运蛋白的基因。例如CvaB、CylB、SpaB、NisT、EpiT、ComA、PedD、LcnC、McbEF、OppD和DppD以及它们的同源物，并且特别是ABC转运蛋白基因可以编码OppD。