[发明专利]与溶基质蛋白酶1特异地发生反应的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及与溶基质蛋白酶(stromelysin)1特异地发生反应的单克隆抗体以及使用了该抗体的免疫染色法及免疫学测定法。

背景技术

在血管、淋巴管以及关节软骨的基底膜或者结缔组织的构成蛋白质即所谓的细胞外基质的分解中，统称为基质金属蛋白酶(MMPs)的一类酶参与其中。MMPs中有亚类，溶基质蛋白酶1、2及3属于溶基质蛋白酶类的亚类。溶基质蛋白酶1也被称作蛋白多糖酶(proteoglycanase)或MMP-3，是在受到各种细胞因子或各种增殖因子等刺激的成纤维细胞或肿瘤细胞中产生的物质。在生物体内，除了在类风湿性关节炎疾病患者的关节局部产生之外，还存在于血液中或关节液中(专利文献1)。因而，患者中的溶基质蛋白酶1的定量被用于类风湿性关节炎的诊断中。

另外，溶基质蛋白酶2(MMP-10)是由Muller等人将基因克隆，从而具有与溶基质蛋白酶1相同的底物特异性(非专利文献1)。溶基质蛋白酶3(MMP-11)是由Basset等人将基因克隆，被认为其与癌的发展程度有关(非专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特公平8-5920号公报

非专利文献

非专利文献1：Muller等，Biochem.J.，253，187-192，1988

非专利文献2：Basset等，Nature，348，699-704，1990

发明内容

发明所要解决的课题

溶基质蛋白酶1、2及3具有非常近似的氨基酸序列和底物特异性，在制作针对溶基质蛋白酶1的抗体时，与溶基质蛋白酶2或3发生交叉反应的可能性很高。上述专利文献1中，虽然得到了很多针对溶基质蛋白酶1的单克隆抗体，但这些抗体具有与溶基质蛋白酶2或3的交叉反应性。为了更加精确地诊断类风湿性关节炎，有必要进一步精度良好地对溶基质蛋白酶1进行定量。

因而，本发明的课题在于以更高的灵敏度更正确地对溶基质蛋白酶1进行定量。

用于解决课题的手段

本发明提供不与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3发生交叉反应、而是与溶基质蛋白酶1特异地发生反应的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体由于不与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3发生交叉反应，因而即便在试样中含有溶基质蛋白酶2或溶基质蛋白酶3，也可仅与溶基质蛋白酶1特异地发生反应。

上述单克隆抗体的对溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3的交叉反应性优选为对溶基质蛋白酶1的反应性的5％以下。这种单克隆抗体对溶基质蛋白酶1更为特异。

另外，本发明提供一种单克隆抗体，其为与由序列号1的一部分氨基酸序列构成的肽特异地反应、且与溶基质蛋白酶1特异地发生反应的单克隆抗体，其中，该氨基酸序列含有序列号1的第425号～第436号的序列、该肽的长度为12～20个氨基酸残基。上述单克隆抗体优选不与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3发生交叉反应。序列号1的氨基酸序列表示溶基质蛋白酶1的氨基酸序列，认为由序列号1的第425号～第436号序列构成的肽与交叉反应性有关。

另外，本发明提供一种单克隆抗体，其为与溶基质蛋白酶1特异地发生反应的单克隆抗体，其中，通过利用赖氨酰内肽酶将溶基质蛋白酶1分解，使所述抗体对溶基质蛋白酶1的反应性消失。上述单克隆抗体优选与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3不发生交叉反应。通过赖氨酰内肽酶的分解使反应性消失的单克隆抗体具有识别溶基质蛋白酶1蛋白质的高级结构进行反应的可能性。

本发明的单克隆抗体可用于免疫染色法。根据使用了本发明的与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3不发生交叉反应的单克隆抗体的免疫染色法，即便试样中含有溶基质蛋白酶2或溶基质蛋白酶3，它们也不会被染色，可以特异性地将溶基质蛋白酶1可视化。

本发明的单克隆抗体可用于对溶基质蛋白酶1进行定量的溶基质蛋白酶1的免疫学测定法。根据使用了本发明的不与溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3发生交叉反应的单克隆抗体的免疫学测定法，即便溶基质蛋白酶2及溶基质蛋白酶3含有在试样中也检测不到这些物质，因而可以准确度良好地对溶基质蛋白酶1进行定量。