[发明专利]乳酸菌及其在猪的直接饲喂微生物中的应用

权利要求书

1.DNA序列，其包含乳酸菌16S rRNA基因编码区的部分，其5′末端包含5’AGAGTTTGATYMTGGCTCAG 3’的序列，其3′末端包含BfaI、Hae III和Msp I之一的限制性酶识别位点，

当所述限制性酶识别位点为Bfa I时，所述DNA序列的长度为约99个碱基对至约103个碱基对，约268个碱基对至约273个碱基对，约260个碱基对至约265个碱基对，约279个碱基对至约284个碱基对，约278个碱基对至约282个碱基对，或约273个碱基对至约277个碱基对；

当所述限制性酶识别位点为Hae III时，所述DNA序列的长度为约329个碱基对至约334个碱基对，约352个碱基对至约357个碱基对，约277个碱基对至约282个碱基对，或约335个碱基对至约339个碱基对；和

当所述限制性酶识别位点为Msp I时，所述DNA序列的长度为约188个碱基对至约192个碱基对。

2.用于鉴定可用作直接饲喂微生物的一种或多种菌株的方法，所述方法包括：

从来自动物胃肠道的细菌分离DNA；

扩增所述DNA；

使用T-RFLP分析扩增的DNA以获得TRF数据；

建立所述TRF数据与目标特征的相关性；

由所述相关性鉴定目标菌株；和

确认所述TRF存在于所述菌株中。

3.一种菌株，其通过权利要求2所述的方法鉴定。

4.如权利要求3所述的菌株，其中所述菌株是潜在的益生菌。

5.如权利要求3所述的菌株，其中所述菌株是潜在的病原。

6.一种方法，其包括向动物施用有效量的至少一种权利要求3所述的菌株。

7.分离的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)菌株PlJ e3(NRRL B-50101)。

8.一种组合物，其包含：

权利要求7所述的菌株；和

分离的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)菌株o246e 33w(NRRL B-50102)。

9.如权利要求8所述的组合物，其还包含分离的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株PlB c6(NRRL B-50103)。

10.一种分离的菌株，其选自嗜酸乳杆菌菌株PlB c6(NRRL B-50103)、唾液乳杆菌菌株o246e 33w(NRRL B-50102)、乳酸片球菌菌株o246e 42(NRRL B-50171)和乳酸片球菌菌株PlJ e3(NRRL B-50101)中的至少一种。

11.一种分离的菌株，其具有权利要求10所述菌株之一的所有鉴定特征。

12.如权利要求10所述的菌株，其还包含载体。

13.一种方法，其包括向动物施用有效量的选自嗜酸乳杆菌菌株PlB c6(NRRL B-50103)、唾液乳杆菌菌株o246e 33w(NRRL B-50102)、乳酸片球菌菌株o246e 42(NRRL B-50171)和乳酸片球菌菌株PlJ e3(NRRL B-50101)中的至少一种菌株。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述菌株是乳酸片球菌菌株PlJ e3(NRRL B-50101)。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述菌株是乳酸片球菌菌株PlJ e3(NRRL B-50101)和唾液乳杆菌菌株o246e 33w(NRRL B-50102)。

16.如权利要求13所述的方法，其中所述菌株是乳酸片球菌菌株PlJ e3(NRRL B-50101)、唾液乳杆菌菌株o246e 33w(NRRL B-50102)和嗜酸乳杆菌菌株PlB c6(NRRL B-50103)。

17.如权利要求13所述的方法，其中所述动物是猪。

18.如权利要求17所述的方法，其中以约1×10⁸总cfu/猪/天至约5×10¹⁰总cfu/猪/天向所述猪施用一种或多种所述菌株。