[发明专利]器官深低温保存液

说明书

技术领域

深低温保存方法被认为是实现器官长期保存的理想途径，问题的关键是器官体积较大，在降温和复温过程中很难克服细胞内外冰晶形成，同时不能避免机械、化学、渗透压以及生物学方面的损伤，所以至今较大体积器官的冻存问题仍未解决。肾脏是人体中机能复杂的器官，在4℃灌注条件下只能离体保存最多50小时。供肾如能在合适的深低温条件下长期保存，将为临床移植工作开辟一个崭新的前景。

背景技术

近期以来，深低温保存细胞、精子、胚胎甚至卵巢组织已先后取得成功，但是复杂器官例如肾脏的深低温保存，却依然是个尚未突破的难题。当今世界上，肾病患者的数量不断增加，肾脏移植的技术也在迅速发展，这就需要大量的肾脏贮备和供应。目前临床肾移植应用的供肾均是在0℃以上保存的，此方法虽然比较成熟、简便，但保存时间有限，国内外学者从改进保存液水平及保存工具等方面着手延长肾脏保存的时间，或在有限的保存时间内完善组织配型工作，以提高供肾的合理使用率和移植后的长期存活率，但仍不能满足临床需求。此外，在国内供体器官缺少的情况下，由于配型、病人条件不符和地域等原因也会造成一定的器官资源浪费。能否在一个国家乃至整个世界范围内共享人白细胞抗原(HLA)配型吻合的肾脏，使每一个受者都能及时得到最优化的供肾？对于这样理想化的愿望，只有通过改进肾脏保存技术，延长供肾保存时间至数周甚至数年，并建立“器官库”(Organ Bank)才能最终实现。但是，要长时间保存供肾，必须进一步降低肾脏保存的温度，抑制组织细胞的代谢率，甚至使细胞代谢完全停止。然后，在需要时将保存的供肾采用合适的手段经“复苏”后再移植。

发明内容

本发明所述器官深低温保存液，由二甲基亚砜、乙酰胺、葡萄糖、甘油、聚乙二醇等成份组成，二甲基亚砜、乙酰胺、葡萄糖、甘油浓度均为0.2～5mol/L，聚乙二醇浓度为1～20mmol/L。在器官生物细胞的能量代谢被完全抑制的深低温条件下，本保存液可保护细胞形态结构完整性，使之处于休眠状态，避免或减少深低温对细胞的冰冻损害，用适当的条件复苏后，可使细胞代谢活动恢复，发挥其生物学功能。本发明所述器官深低温保存液，可用于肾脏的深低温保存(-200℃～-20℃)，也可应用于其他器官的深低温保存，实现器官长期保存的目标。

具体实施方式

将经本发明所述器官深低温保存液灌注后的肾脏放入盛有保存液的冻存盒中，使用程序冷冻仪控制速率冷冻，降至-30℃或-80℃并保持1小时后，转入-30℃或-80℃冰箱。保存30天后使用程序冷冻仪控制速率升温至4℃，洗脱保存液进行相关组织病理学检查及其他操作。

通过本发明所述器官深低温保存液进行深低温保存后的新西兰大白兔肾脏，大体形态未见明显冰冻损害，皮髓质结构清晰，光学显微镜下肾小球内毛细血管襻清晰可见，肾小球囊无扩张，肾小管上皮细胞轻微混浊肿胀，电子显微镜下肾小球滤过膜、足细胞和系膜细胞等超微结构完整，细胞核染色质浓密，胞质内细胞器数目正常，上皮细胞腔面刷状缘微绒毛排列整齐，血管内皮细胞及弹性膜完整，显示肾脏经深低温保存后组织形态完整。

通过本发明所述器官深低温保存液进行深低温保存后新西兰大白兔肾脏，离体灌注后进行酚红排泌试验(PSP试验)、靛胭脂实验测定肾小管功能，PSP15分钟排泌量为28.5％，120分钟排泌量为57.6％，均排泌量高于正常值(25％；55％)，靛胭脂灌注后片刻即可见到蓝色尿液排出，显示肾脏经深低温保存后肾小管排泌功能正常。

通过本发明所述器官深低温保存液进行深低温保存后的比格犬肾脏，自体肾移植术后进行彩色多普勒超声、发射单光子计算机断层扫描(ECT)和静脉分泌造影(IVP)等检查，术后复查彩超可见移植肾脏内血流通过，IVP和ECT也显示肾脏功能持续存在。